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鸭1型甲肝病毒亚型VP3基因的克隆与原核表达

黄剑梅 傅秋玲 傅光华 万春和 陈翠腾 陈珍 程龙飞 施少华 陈红梅 黄瑜

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鸭1型甲肝病毒亚型VP3基因的克隆与原核表达

    作者简介: 黄剑梅(1988-),女,硕士研究生,研究方向:预防兽医学(E-mail:hjianmei10@163.com)
    通讯作者: 黄瑜(1965-),男,博士,研究员,研究方向:动物传染病学(E-mail:huangyu_815@163.com)
  • 基金项目:

    国家自然科学基金项目(31472222);福建省科技计划项目省属公益类科研院所基本科研专项(2014R1023-3);现代农业产业技术体系建设专项(CARS-43);福建省自然科学基金项目(2015J01113);新世纪百千万人才工程国家级人选科研补助资金(NCNCMTPC-2009)

  • 中图分类号: S852.6

Cloning and Prokaryotic Expression of VP3 Gene of Duck Hepatitis A Virus Type 1 Subtype

  • 摘要: 参照鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)的基因组序列设计了1对VP3基因特异性扩增引物,通过RT-PCR方法扩增获得了DHAV-1a结构蛋白VP3基因,将纯化的VP3基因与pEASYTM-Blunt Zero Cloning Vector连接,构建DHAV-1a VP3基因克隆重组质粒,然后将VP3基因片段插入pET-32a(+)表达载体,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞。以1.0 mmolL-1 IPTG于37℃诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明VP3基因于大肠杆菌中成功表达,其分子量为47 kDa,且表达的VP3蛋白能够与Anti-His Mouse mAb发生特异性反应,具有良好的生物活性,为进一步研究DHAV-1a VP3 蛋白功能和以VP3蛋白为抗原研制DHAV-1a诊断试剂盒奠定基础。
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出版历程
    收稿日期: 
  • 初稿:  2015-04-01
  • 修改稿:  2015-05-08

鸭1型甲肝病毒亚型VP3基因的克隆与原核表达

    通讯作者: 黄瑜, huangyu_815@163.com
    作者简介: 黄剑梅(1988-),女,硕士研究生,研究方向:预防兽医学(E-mail:hjianmei10@163.com)
  • 1. 江西农业大学动物科学技术学院, 江西 南昌 330045;
  • 2. 福建省农业科学院畜牧兽医研究所, 福建 福州 350013
基金项目:  国家自然科学基金项目(31472222);福建省科技计划项目省属公益类科研院所基本科研专项(2014R1023-3);现代农业产业技术体系建设专项(CARS-43);福建省自然科学基金项目(2015J01113);新世纪百千万人才工程国家级人选科研补助资金(NCNCMTPC-2009)

摘要: 参照鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)的基因组序列设计了1对VP3基因特异性扩增引物,通过RT-PCR方法扩增获得了DHAV-1a结构蛋白VP3基因,将纯化的VP3基因与pEASYTM-Blunt Zero Cloning Vector连接,构建DHAV-1a VP3基因克隆重组质粒,然后将VP3基因片段插入pET-32a(+)表达载体,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞。以1.0 mmolL-1 IPTG于37℃诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明VP3基因于大肠杆菌中成功表达,其分子量为47 kDa,且表达的VP3蛋白能够与Anti-His Mouse mAb发生特异性反应,具有良好的生物活性,为进一步研究DHAV-1a VP3 蛋白功能和以VP3蛋白为抗原研制DHAV-1a诊断试剂盒奠定基础。

English Abstract

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