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山羊地方性鼻内肿瘤病毒SU蛋白的表达及其多克隆抗体的制备和特性分析

江锦秀 张靖鹏 林裕胜 游伟 胡奇林

江锦秀,张靖鹏,林裕胜,等. 山羊地方性鼻内肿瘤病毒SU蛋白的表达及其多克隆抗体的制备和特性分析 [J]. 福建农业学报,2021,36(2):135−140 doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2021.02.001
引用本文: 江锦秀,张靖鹏,林裕胜,等. 山羊地方性鼻内肿瘤病毒SU蛋白的表达及其多克隆抗体的制备和特性分析 [J]. 福建农业学报,2021,36(2):135−140 doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2021.02.001
JIANG J X, ZHANG J P, LIN Y S, et al. Expression of SU protein of ENTV-2FJ strain, preparation and characterstic analylsis of its polyclonal antibody [J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences,2021,36(2):135−140 doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2021.02.001
Citation: JIANG J X, ZHANG J P, LIN Y S, et al. Expression of SU protein of ENTV-2FJ strain, preparation and characterstic analylsis of its polyclonal antibody [J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences,2021,36(2):135−140 doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2021.02.001

山羊地方性鼻内肿瘤病毒SU蛋白的表达及其多克隆抗体的制备和特性分析

doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2021.02.001
基金项目: 福建省科技重大专项(2019NZ09007);福建省科技计划公益类项目(2018R1023-1)
详细信息
    作者简介:

    江锦秀(1987−),女,硕士,助理研究员,主要从事动物传染病研究(E-mail:59714800@qq.com

    通讯作者:

    胡奇林(1963−),男,硕士,研究员,主要从事动物传染病学和免疫学研究(E-mail:hql562713@163.com

  • 中图分类号: S 855.3

Expression of SU protein of ENTV-2FJ strain, preparation and characterstic analylsis of its polyclonal antibody

  • 摘要:   目的  明确山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)SU蛋白的功能。  方法  采用RT-PCR 方法从 ENTV-2FJ分离株中扩增获得SU基因片段,将其克隆到pMD-19T载体;测序验证后,再亚克隆到PET-32a(+)上,在RosettagamiB(DE3) 感受态细胞进行表达,采用SDS-PAGE 、Western-blot和ELISA对重组蛋白进行鉴定及抗原性分析。  结果  结果显示,表达的重组菌融合蛋白大小约64.38 kD,在IPTG终浓度0.4 mmol·L−1、37 ℃诱导4 h表达效果最好。用纯化的ENTV-2进行SDS-PAGE,SU重组蛋白免疫小鼠制备的多克隆抗体作为一抗,进行 Western-blot,结果显示鼠抗SU蛋白多克隆抗体能与ENTV-2抗原进行特异性的反应。  结论  表达的SU蛋白有较好的抗原性,为制备ENTV-2特异性单克隆抗体及建立ENTV-2特异性血清学方法奠定了基础。
  • 图  1  SU基因RT-PCR扩增结果

    注:M:DL2 000 DNA Marker 1:SU基因PCR扩增片段。

    Figure  1.  RT-PCR amplification result of SU gene

    Note: M: DL2 000 DNA Marker ; 1:PCR amplification results of SU gene.

    图  2  SU-19T质粒双酶切结果

    注:M:DL10 000 DNA Marker; 1:SU-19T质粒双酶切。

    Figure  2.  Double digestion result of SU-19T plasmid

    Note: M: DL10 000 DNA Marker; 1: double digestion of SU-19T plasmid.

    图  3  PET32 a(+)质粒双酶切结果

    注:M:DL10 000 DNA Marker ;1: PET32 a(+)质粒双酶切。

    Figure  3.  Double digestion result of PET32 a(+)

    Note: M: DL10 000 DNA Marker; 1: double digestion of PET32 a(+).

    图  4  不同IPTG诱导浓度对SU重组蛋白诱导表达的影响

    注:M为蛋白Marker; 1为pET-32a(+)空载;2-7为菌液IPTG诱导终浓度分别为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mmol·L-1

    Figure  4.  Effect of IPTG at different concentrations on the induced expression of SU recombinant protein

    Note: M: Protein Marker; 1:Un-induced pET-32a(+) / RosettagamiB(DE3); 2-7: pET-32a(+)-SU / RosettagamiB(DE3)induced with 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0 and 1.2 mmol·L-1 IPTG, respectively.

    图  5  不同IPTG诱导时间对SU重组蛋白诱导表达的影响

    注:M为蛋白Marker; 1为pET-32a(+)空载;2~6为菌液IPTG诱导时间分别为3、4、5、6h、过夜。

    Figure  5.  Effect of different IPTG induction time on the expression of SU recombinant protein

    Note: M:Protein Marker; 1:Un-induced pET-32a(+) / RosettagamiB(DE3); 2-6: pET-32a(+)-SU/RosettagamiB(DE3)induced for 3, 4, 5, 6 h and overnight, respectively.

    图  6  SU重组蛋白纯化结果

    注:M为蛋白Marker; 1为未纯化蛋白;2为纯化蛋白。

    Figure  6.  The purification result of SU fusion protein

    Note: M: Protein Marker; 1:unpurified protein; 2: purified protein.

    图  7  Western-blot 分析结果

    注:M为蛋白Marker; (图A)1:一抗为正常对照小鼠血清(空白对照);(图B)2:一抗为鼠抗纯化ENTV-2多抗(阳性对照);(图C)3:一抗为鼠抗SU蛋白多抗。

    Figure  7.  The result of Western-blot analysis

    Note: M:Protein Marker;(Fig A)1:the primary antibody is the serum of normal control mice (blank control); (Fig B)2:the primary antibody is the mouse anti purified ENTV-2 polyclonal antibody (positive control); (Fig C)3:the primary antibody is the mouse anti-SU protein polyclonal antibody.

    表  1  引物设计

    Table  1.   Primer design

    引物名称
    Primer name
    引物序列
    primer sequence
    酶切位点
    restriction
    enzyme
    cutting site
    ENTV-2SU(F) 5′-CCGGAATTCTTTGTGTTTTTC
    CGCAGGAT-3′
    ECORⅠ
    ENTV-2SU(R) 5′-CCAAGCTTGCTCACACTTCT
    TTCCTTGC-3′
    Hind Ⅲ
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    表  2  ELISA试验结果

    Table  2.   ELISA result

    抗体
    antibody
    包被抗原 coating antigen
    ENTV-2SU
    SU(1∶4) + +
    SU(1∶8) +
    SU(1∶16) +
    SU(1∶32) +
    ENTV-2(1∶4) + +
    ENTV-2 (1:8) + +
    ENTV-2 (1:16) + +
    ENTV-2 (1:32) + +
    注:“+”表示结果为阳性;“−”表示结果为阴性。
    Note: “ +” means the result is positive; “−“ means the result is negative.
    下载: 导出CSV
  • [1] VITELLOZZI G, MUGHETTI L, PALMARINI M, et al. Enzootic intranasal tumour of goats in Italy [J]. Journal of Veterinary Medicine, Series B, 1993, 40(7): 459−468.
    [2] 林曦, 郝先谱, 赵振华, 等. 山羊鼻内腺瘤和腺癌的病理学研究 [J]. 畜牧兽医学报, 1995, 26(5):455−461.

    LIN X, HAO X P, ZHAO Z H, et al. Pathological studies on intranasal adenoma and adenocarcinoma in goats [J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 1995, 26(5): 455−461.(in Chinese)
    [3] 沈克飞, 唐达, 杨柳, 等. 山羊地方性鼻内肿瘤病毒重庆株基因组序列分析 [J]. 中国生物制品学杂志, 2019, 32(8):853−857, 869.

    SHEN K F, TANG D, YANG L, et al. Analysis of genome sequence of goat enzootic nasal tumor virus isolate CQ [J]. Chinese Journal of Biologicals, 2019, 32(8): 853−857, 869.(in Chinese)
    [4] 林裕胜, 江锦秀, 游伟, 等. 山羊地方性鼻内肿瘤病毒和支原体混合感染山羊的诊断 [J]. 中国兽医杂志, 2017, 53(10):59−61, 49.

    LIN Y S, JIANG J X, YOU W, et al. Diagnosis of enzootic nasal tumor virus and mycoplasma mixed infection in goats [J]. Chinese Journal of Veterinary Medicine, 2017, 53(10): 59−61, 49.(in Chinese)
    [5] 江锦秀, 林裕胜, 江斌, 等. 福建山羊地方性鼻内肿瘤的分子流行病学调查 [J]. 福建农业学报, 2017, 32(8):837−841.

    JIANG J X, LIN Y S, JIANG B, et al. Molecular epidemiology of enzootic nasal tumor virus on goats in Fujian [J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2017, 32(8): 837−841.(in Chinese)
    [6] 何亚鹏, 付明哲, 许信刚, 等. 山羊地方性鼻内肿瘤病毒Shaanxi株前病毒全基因组克隆及生物信息学分析 [J]. 中国预防兽医学报, 2017, 39(1):63−66.

    HE Y P, FU M Z, XU X G, et al. Complete genomic cloning and bioinformatics analysis of goat enzootic nasal tumor virus Shaanxi strain [J]. Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine, 2017, 39(1): 63−66.(in Chinese)
    [7] 刘菲, 冯迎春, 颜其贵, 等. 四川一起山羊地方性鼻内肿瘤疫情的诊断 [J]. 畜牧与兽医, 2011, 43(6):83−86.

    LIU F, FENG Y C, YAN Q G, et al. Diagnosis of an endemic intranasal tumor in goats in Sichuan [J]. Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2011, 43(6): 83−86.(in Chinese)
    [8] 江锦秀, 林裕胜, 张靖鹏, 等. 山羊地方性鼻内肿瘤病毒ENTV-2FJ株的分离纯化和全基因组序列分析 [J]. 农业生物技术学报, 2020, 28(2):313−324.

    JIANG J X, LIN Y S, ZHANG J P, et al. Isolation, purification and genome sequence analysis of enzootic nasal tumor virus of goats (Capra hircus) strain ENTV-2FJ [J]. Journal of Agricultural Biotechnology, 2020, 28(2): 313−324.(in Chinese)
    [9] 冯迎春, 颜其贵, 郭万柱, 等. 山羊地方性鼻内肿瘤病毒ENTV-SC株基因组cDNA文库的构建及生物信息学分析 [J]. 中国兽医科学, 2011, 41(2):126−130.

    FENG Y C, YAN Q G, GUO W Z, et al. Construction and bioinformatics analysis of cDNA library of goat enzootic nasal tumor virus SC strain [J]. Veterinary Science in China, 2011, 41(2): 126−130.(in Chinese)
    [10] 谢智勇, 马新玥, 万莉, 等. 羊地方性鼻内肿瘤病毒SU基因的克隆与原核表达 [J]. 中国兽医科学, 2013, 43(11):1175−1179.

    XIE Z Y, MA X Y, WAN L, et al. Cloning and prokaryotic expression of SU gene of enzootic nasal tumor virus from goat [J]. Chinese Veterinary Science, 2013, 43(11): 1175−1179.(in Chinese)
    [11] MAEDA N, FAN H. Signal transduction pathways utilized by enzootic nasal tumor virus (ENTV-1) envelope protein in transformation of rat epithelial cells resemble those used by jaagsiekte sheep retrovirus [J]. Virus Genes, 2008, 36(1): 147−155. doi: 10.1007/s11262-007-0193-x
    [12] DE LAS HERAS M, ORTÍN A, BENITO A, et al. In-situ demonstration of mitogen-activated protein kinase erk 1/2 signalling pathway in contagious respiratory tumours of sheep and goats [J]. Journal of Comparative Pathology, 2006, 135(1): 1−10. doi: 10.1016/j.jcpa.2006.02.002
    [13] 张月梅, 马学恩, 么宏强, 等. 绵羊肺腺瘤病毒缺失型SU蛋白真核表达载体的构建 [J]. 中国兽医学报, 2017, 37(3):420−425.

    ZHANG Y M, MA X E, YAO H Q, et al. Construction of eukaryotic expression vector for SU defective protein of JSRV [J]. Chinese Journal of Veterinary Science, 2017, 37(3): 420−425.(in Chinese)
    [14] 张月梅, 赵世华, 么宏强, 等. 绵羊肺腺瘤病毒SU蛋白与Hyal-2蛋白的结合域研究 [J]. 动物医学进展, 2016, 37(4):49−53. doi: 10.3969/j.issn.1007-5038.2016.04.010

    ZHANG Y M, ZHAO S H, YAO H Q, et al. Study on possible binding region between SU protein of ovine pulmonary adenomatosis virus and hyal-2 protein [J]. Progress in Veterinary Medicine, 2016, 37(4): 49−53.(in Chinese) doi: 10.3969/j.issn.1007-5038.2016.04.010
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出版历程
  • 收稿日期:  2020-09-03
  • 修回日期:  2020-12-16
  • 网络出版日期:  2021-02-08
  • 刊出日期:  2021-02-28

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