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丝状支原体山羊亚种特异性蛋白基因Mmc-3740的克隆表达和免疫原性分析

张靖鹏 江锦秀 林裕胜 游伟 胡奇林

张靖鹏,江锦秀,林裕胜,等. 丝状支原体山羊亚种特异性蛋白基因Mmc-3740的克隆表达和免疫原性分析 [J]. 福建农业学报,2019,34(10):1124−1128. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2019.10.002
引用本文: 张靖鹏,江锦秀,林裕胜,等. 丝状支原体山羊亚种特异性蛋白基因Mmc-3740的克隆表达和免疫原性分析 [J]. 福建农业学报,2019,34(10):1124−1128. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2019.10.002
ZHANG J P, JIANG J X, LIN Y S, et al. Cloning and Expression of Specific Protein Gene, Mmc -3740 , of Mycoplasma mycoides [J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences,2019,34(10):1124−1128. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2019.10.002
Citation: ZHANG J P, JIANG J X, LIN Y S, et al. Cloning and Expression of Specific Protein Gene, Mmc - 3740 , of Mycoplasma mycoides [J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences,2019,34(10):1124−1128. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2019.10.002

丝状支原体山羊亚种特异性蛋白基因Mmc-3740的克隆表达和免疫原性分析

doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2019.10.002
基金项目: 国家重点研发计划项目(2016YFD0500906);福建省农业科学院科技传销团队建设项目(2017-09);福建省属公益类科院院所基本科研专项(2019R1026-17);福建省农业科学院青年人才创新基金(YC-20180-3)
详细信息
    作者简介:

    张靖鹏(1988−),男,硕士,主要从事动物传染病研究(E-mail: 870063543@qq.com

    通讯作者:

    胡奇林(1963−),男,硕士,研究员,主要从事动物传染病学和免疫学研究(E-mail: hql562713@163.com

  • 中图分类号: S852.62

Cloning and Expression of Specific Protein Gene, Mmc-3740, of Mycoplasma mycoides

  • 摘要:   目的  构建表达丝状支原体山羊亚种特异性蛋白基因Mmc-3740的重组表达菌,为Mmc-3740蛋白的进一步研究与应用奠定基础。  方法  采用PCR技术从Mmc-47中扩增出该基因,进行克隆、测序,将克隆质粒与pET-28a分别双酶切,回收正确的片段进行连接构建重组表达质粒,转化至表达菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,产物用SDS-PAGE 检测,用镍柱对其纯化后免疫小鼠获得高免血清,并进行Western-blot验证。  结果  成功构建了克隆和表达载体,重组菌表达目的蛋白大小约21 ku。表达产物通过镍柱纯化后可得到单一的目的蛋白条带,Western-blot检测结果显示所表达的目的蛋白有较好的免疫原性。  结论  成功在BL21(DE3)宿主菌内表达了Mmc-3740重组蛋白。
  • 图  1  目的片段的PCR扩增

    注:1. DNA 标准 DL2000;2. 目的基因片段;3. 阴性对照。

    Figure  1.  PCR amplification of target fragment

    Note: 1. DNA maker DL2000; 2. product of target gene fragments; 3. negative control.

    图  2  重组质粒的双酶切

    注:1. DNA 标准 DL5000;2. 重组质粒双酶切产物;3. 阴性对照。

    Figure  2.  Double-enzyme digestion of recombinant plasmids

    Note: 1. DNA maker DL2000; 2. products of recombinant plasmid digestion; 3. negative control.

    图  3  诱导表达的结果

    注:1. 蛋白分子量标准;2. 空载体;3. 诱导的pET-28a-3740。

    Figure  3.  Results of induced expression

    Note: 1. protein molecular weight marker; 2. blank vector; 3. expression vector pET-28a-3740.

    图  4  重组蛋白Western bolt结果

    注:1.蛋白分子量标准;2. 重组蛋白与其高免血清的免疫印迹;3.阴性对照。

    Figure  4.  Immunoblotting of recombinant protein

    Note:1. protein molecular weight marker; 2. immunoblotting of recombinant protein with its antiserum; 3. negative control.

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出版历程
  • 收稿日期:  2019-07-15
  • 修回日期:  2019-09-01
  • 网络出版日期:  2019-11-06
  • 刊出日期:  2019-10-01

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