HPLC Analysis on Mequindox Residues in Tissues of Eel
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摘要: 建立鳗鲡各组织中乙酰甲喹残留量的高效液相色谱测定方法，高效液相色谱检测条件为：采用SunFireTM C18柱（4.6 mm×150 mm，3.5 μm），柱温35℃；以甲醇：水（40：60，体积比）为流动相，流速为0.8 mL·min-1；采用二极管阵列检测器，检测波长239 nm。结果表明：在0.05～2.5 μg·mL-1范围内，乙酰甲喹具有良好的线性关系，含量与峰面积的相关系数达0.999以上；乙酰甲喹在鳗鲡肌肉、肾、肝和血浆中的检出限分别为3 μg·kg-1、15 μg·kg-1、15 μg·kg-1、15 μg·L-1，鳗鲡各组织中乙酰甲喹回收率在76%～90%，相对标准偏差均小于10%（n=6）。本方法简便、快捷、灵敏度高，具有良好的重复性，满足鳗鲡各组织基质内乙酰甲喹残留量的快速定量分析的要求。Abstract: An HPLC methodology was developed for determining mequindox residues in the organs of eels.The analysis was conducted under the following conditions: SunFireTM C18 column (4.6 mm×150 mm, 3.5 μm) at 35℃, methanol:deionized water (v/v 40:60) for themobile phase with a flow rate of 0.8 mL·min-1, and 239 nm wavelength seton PDA detector for optical density measurements. With in the mequindox concentration range of 0.05-2.5 μg·mL-1, an excellent linear regression between the drug concentration and the peak area under curve was obtained with a correlation coefficient greater than 0.999.LODs of mequindox in the muscle, liver, kidney, and plasma from the eelswere 3 μg·kg-1, 15μg·kg-1, 15 μg·kg-1, and 15 μg·L-1, respectively. The average mequindox recovery rate of the method ranged from 76% to 90% with RSD (n=6) below 10%. It was, thus, concluded that the newly developed simple, rapidmethodology was highly sensitive and repeatable in detecting mequindox residuein the tissues of the eels.
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图 1 (a)标准溶液3D图谱和(b)乙酰甲喹紫外光谱
Figure 1. 3-D graphs of standard (a) and UV spectra(b) of mequindox
图 2 乙酰甲喹高效液相色谱
注：a为乙酰甲喹标准品，b为空白肌肉，c为给药肌肉，d为空白肾，e为给药肾，f为空白肝，g为给药肝，h为空白血浆，i为给药血浆。
Figure 2. HPLC chromatograms and UV spectra of mequindox
图 3 不同提取溶液的提取效率比较
注：A为二氯甲烷，提取效率为82.6%；B为乙酸乙酯，提取效率为78.4%；C为二氯甲烷:乙酸乙酯(1:1)，提取效率为79.7%；D为二氯甲烷:乙酸乙酯(2:1)，提取效率为82.1%；E为二氯甲烷:乙酸乙酯(3:1)，提取效率为98.2%；F为二氯甲烷:乙酸乙酯(4:1)，提取效率为84.4%。
Figure 3. Extraction efficiencies of various solvents
表 1 回收率试验结果
Table 1. Recovery rates of test
组织 添加水平
/(μg·mL-1)回收率(n=6) 平均回收率
/%RSD
/%1 2 3 4 5 6 肌肉 0.05 73.9 78.4 77.3 82.1 79.1 80.3 78.5 9.56 0.1 81.4 85.3 82.5 83.6 79.7 83.5 82.7 7.35 1.0 83.9 86.1 87.6 86.4 92.3 88.1 87.4 3.21 肝 0.05 78.1 72.4 84.5 80.1 79.8 71.8 77.8 8.28 0.1 81.6 90.9 84.6 86.2 83.6 82.5 84.9 6.94 1.0 89.3 85.8 81.8 89.6 92.9 90.3 88.3 4.42 肾 0.05 78.3 71.6 75.3 70.8 82.4 80.2 76.4 9.12 0.1 83.2 85.9 88.2 81.9 90.5 93.1 87.1 5.93 1.0 94.7 93.4 88.3 89.1 86.2 85.3 89.5 4.25 血浆 0.05 86.5 83.7 82.1 75.1 74.2 76.9 79.8 9.32 0.5 82.3 80.8 88.4 82.1 76.3 73.2 80.5 6.55 1.0 83.4 79.2 82.5 88.1 90.2 80.5 84.0 5.13 
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表 2 不同鳗鲡组织样品中乙酰甲喹残留量量及检测方法日间精密度
Table 2. Mequindox residues in tissues of eel and inter-dayprecision of detection method
给药
方式组织
样品测定值1
/(μg·kg-1)测定值2
/(μg·kg-1)测定值3
/(μg·kg-1)测定值4
/(μg·kg-1)测定值5
/(μg·kg-1)测定值6
/(μg·kg-1)平均值
/(μg·kg-1)标准差 RSD
/%口灌 肌肉 2864 3016 2876 3019 2907 2827 2918 81 2.78 肝 641 643 628 615 633 666 638 17 2.69 肾 502 488 517 528 503 478 503 18 3.64 血浆 2153 2266 2152 2166 2296 2107 2190 74 3.37 浸浴 肌肉 14 17 17 14 16 17 16 1 9.30 肝 301 282 313 309 298 289 299 12 3.93 肾 143 157 161 158 145 156 153 7 4.86 血浆* 413 432 447 450 442 430 436 14 3.14 注：*血浆样品乙酰甲喹含量单位为：μg·L-1
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