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鳗弧菌单克隆抗体-胶体金检测方法的建立

吴斌 樊海平 王雪妹 黄小红 张新艳 叶小军 林志铿

吴斌, 樊海平, 王雪妹, 黄小红, 张新艳, 叶小军, 林志铿. 鳗弧菌单克隆抗体-胶体金检测方法的建立[J]. 福建农业学报, 2016, 30(11): 1145-1150. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2016.11.002
引用本文: 吴斌, 樊海平, 王雪妹, 黄小红, 张新艳, 叶小军, 林志铿. 鳗弧菌单克隆抗体-胶体金检测方法的建立[J]. 福建农业学报, 2016, 30(11): 1145-1150. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2016.11.002
WU Bin, FAN Hai-ping, WANG Xue-mei, HUANG Xiao-hong, ZHANG Xin-yan, YE Xiao-jun, LI Zhi-keng. Rapid Detection of Monoclonal Antibody against Vibrio anguillarum by Using Conjugated Colloidal Gold[J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2016, 30(11): 1145-1150. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2016.11.002
Citation: WU Bin, FAN Hai-ping, WANG Xue-mei, HUANG Xiao-hong, ZHANG Xin-yan, YE Xiao-jun, LI Zhi-keng. Rapid Detection of Monoclonal Antibody against Vibrio anguillarum by Using Conjugated Colloidal Gold[J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2016, 30(11): 1145-1150. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2016.11.002

鳗弧菌单克隆抗体-胶体金检测方法的建立

doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2016.11.002
基金项目: 

现代农业产业技术体系建设专项 CARS-46-35

福建省产业技术开发项目 闽发改高技(2008-796

详细信息
    作者简介:

    吴斌(1978-),男,硕士,高级工程师,主要从事水产动物病害分子免疫学研究(E-mail:wubinfire@126.com)

    通讯作者:

    樊海平(1967-),男,硕士,研究员,主要从事水产动物病害研究(E-mail:fanhaiping16@163.com)

  • 中图分类号: S917

Rapid Detection of Monoclonal Antibody against Vibrio anguillarum by Using Conjugated Colloidal Gold

  • 摘要: 以灭活鳗弧菌(SMW5)全菌为抗原,应用杂交瘤技术,制备了鳗弧菌单克隆抗体3株,分别命名为1H9、1C12、6F8,细胞亚类分别为IgG2a、IgM、IgG2b,其中1H9腹水效价为1:6.4×105。制备鳗弧菌(SMW5)兔多克隆抗体,效价为1:3.2×105。应用纳米胶体金颗粒标记单克隆抗体1H9并制备金标垫,抗鳗弧菌(SMW5)兔多克隆抗体与羊抗鼠抗体作为捕获抗体包被硝酸纤维素膜,分别作为检测线T和质控线C,建立鳗弧菌的胶体金免疫层析快速检测方法。经过对试纸条的特异性和灵敏度测定,结果表明:试纸条与嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、豚鼠气单胞菌、创伤弧菌、副溶血弧菌、副溶藻弧菌、迟缓爱德华氏菌,7种水产常见病原菌没有交叉反应,与鳗弧菌特异性反应,检测灵敏度为6.3×104cfu·mL-1,检测所需时间低于10 min。所制备的鳗弧菌胶体金免疫层析检测试纸条具有快速、简便、特异性高和适应基层生产推广应用等优点。
  • 图  1  金标试纸条特异性检测

    Figure  1.  Specificity test on colloidal gold test strip

    图  2  试纸条检测鳗弧菌(SMW5)灵敏度试验结果

    Figure  2.  Sensitivity of gold test strip on V. anguillarum (SMW5)

    表  1  单克隆抗体上清液效价及亚类鉴定

    Table  1.   Titers and subclasses of McAb supernatant

    单抗株 效价 IgG亚类
    1H9 1∶6400 IgG2a
    1C12 1∶3200 IgM
    6F8 1∶800 IgG2b
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    表  2  单克隆抗体特异性试验

    Table  2.   Specificity test on McAbs

    菌株 交叉反应结果
    1H9 1C12 6F8
    鳗弧菌(SMW5)
    鳗弧菌(参考株)
    溶藻弧菌(Js60517NA1)
    创伤弧菌(FJ04-L1)
    副溶血弧菌(ATCC17802)
    哈维氏弧菌(03152)
    河流弧菌(参考株)
    嗜水气单胞菌(ML316)
    嗜水气单胞菌(JS01-1)
    温和气单胞菌(Fp60325NA)
    非0-1群霍乱弧菌(96-2)
    类志贺邻单胞(LCCi190625)
    无乳链球菌(070717LL)
    注:“-”表示阴性结果,“+”表示阳性结果。
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    表  3  单克隆抗体灵敏度

    Table  3.   Sensitivity test on McAbs

    细胞株 McAb 灵敏度 /
    (cfu·mL-1)
    1H9 4×103
    1C12 2×103
    6F8 8×103
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    表  4  鳗弧菌胶体金试纸条交叉反应测试结果

    Table  4.   Cross reactivity of colloidal gold test strip on 10 bacteria strains

    序号 菌株 结果判定
    1 鳗弧菌(SMW5) +
    2 鳗弧菌(标准株) +
    3 鳗弧菌(1H00003) ±
    4 副溶血弧菌(ATCC17802) -
    5 溶藻弧菌(Js60517NA1) -
    6 创伤弧菌(FJ04-L1) -
    7 嗜水气单胞菌(ML316) -
    8 温和气单胞菌(Fp60325NA) -
    9 豚鼠气单胞菌(AB40511NA1) -
    10 迟缓爱德华氏菌(AL60306NA1) -
    11 阴性对照(BSA) -
    注:“-”表示阴性结果;“+”表示阳性结果;“±”表示弱阳性结果。
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    表  5  试纸条检测鳗弧菌(SMW5)灵敏度试验结果

    Table  5.   Sensitivity of gold test strip on V. anguillarum (SMW5)

    序号 菌体浓度/
    (cfu·mL-1)
    检测结果
    1 6.3×103 -
    2 6.3×104 ±
    3 6.3×105 +
    4 6.3×106 +
    5 6.3×107 +
    6 6.3×108 +
    注:“-”表示阴性结果;“+”表示阳性结果;“±”表示弱阳性结果。
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出版历程
  • 收稿日期:  2016-05-18
  • 修回日期:  2016-07-14
  • 刊出日期:  2016-11-01

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