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猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

王晨燕 王隆柏 吴学敏 陈如敬 车勇良 周伦江

王晨燕, 王隆柏, 吴学敏, 陈如敬, 车勇良, 周伦江. 猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 福建农业学报, 2017, 32(8): 823-827. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2017.08.003
引用本文: 王晨燕, 王隆柏, 吴学敏, 陈如敬, 车勇良, 周伦江. 猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 福建农业学报, 2017, 32(8): 823-827. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2017.08.003
WANG Chen-yan, WANG Long-bai, WU Xue-min, CHEN Ru-jing, CHE Yong-liang, ZHOU Lun-jiang. Double Antibody Sandwich ELISA for Detection of Porcine Epidemic Diarrhea Virus[J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2017, 32(8): 823-827. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2017.08.003
Citation: WANG Chen-yan, WANG Long-bai, WU Xue-min, CHEN Ru-jing, CHE Yong-liang, ZHOU Lun-jiang. Double Antibody Sandwich ELISA for Detection of Porcine Epidemic Diarrhea Virus[J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2017, 32(8): 823-827. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2017.08.003

猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2017.08.003
基金项目: 

福建省科技计划项目——省属公益类科研院所基本科研专项 2017R1023-8

福建省农业科学院青年创新基金项目 MYQJ2015-

福建省科技创新平台建设项目——福建省畜禽疫病防控技术重大研发平台 2014N2003-4

详细信息
    作者简介:

    王晨燕(1988-), 女, 硕士, 助理研究员, 主要从事动物传染病研究(E-mail:329177624@qq.com)

    通讯作者:

    周伦江(1973-)男, 博士, 研究员, 主要从事动物病毒学与分子生物学(E-mail:lunjiang@163.com)

  • 中图分类号: S767.5

Double Antibody Sandwich ELISA for Detection of Porcine Epidemic Diarrhea Virus

  • 摘要: 采用特异性好的鼠源抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)单克隆抗体为捕获抗体,兔源多克隆抗体为检测抗体,建立PEDV双抗体夹心ELISA检测方法。结果显示,该方法的最佳反应条件为:抗PEDV单克隆抗体E1包被质量浓度4.40 μg·mL-1,37℃包被2 h,采用5% BSA封闭液封闭1 h,兔抗PEDV抗体工作质量浓度为5.91 μg·mL-1,酶标二抗稀释度为1:2000,以OD450nm ≥ 0.381作为阳性判定标准。该ELISA方法对猪轮状病毒和猪传染性胃肠炎病毒无交叉反应。敏感度可达30 μg·mL-1(5×103.12);重复性变异系数小于10%。采用该方法和RT-PCR方法同时检测临床样品42份,阳性样品符合率为92.30%,表明建立的PEDV双抗体夹心ELISA检测方法具有特异性好、敏感性高和方便快捷等优点,可用于PEDV快速检测。
  • 图  1  双抗体夹心ELISA特异性试验

    Figure  1.  Specificity of DAS-ELISA

    图  2  双抗体夹心ELISA敏感性试验

    Figure  2.  Sensitivity of DAS-ELISA

    表  1  批内和批间重复试验结果(n=5)

    Table  1.   Intra-and inter-batch reproducibility test results on DAS-ELISA

    样品 批内重复试验 批间重复试验
    平均数 方差 变异系数
    /%
    平均数 方差 变异系数
    /%
    1 1.050 0.021 2.003 0.778 0.023 2.998
    2 0.655 0.020 3.128 0.897 0.036 4.056
    3 0.774 0.031 4.007 0.920 0.033 3.588
    4 0.589 0.018 3.122 0.691 0.020 2.975
    5 1.255 0.058 4.589 1.320 0.049 3.745
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出版历程
  • 收稿日期:  2017-05-16
  • 修回日期:  2017-07-07
  • 刊出日期:  2017-08-28

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