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炭疽菌侵染后刺葡萄果皮酵母双杂交cDNA文库构建

雷龑 谢倩 陈婷 刘鑫铭 陈清西

雷龑,谢倩,陈婷,等. 炭疽菌侵染后刺葡萄果皮酵母双杂交cDNA文库构建 [J]. 福建农业学报,2020,35(12):1330−1335 doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2020.12.006
引用本文: 雷龑,谢倩,陈婷,等. 炭疽菌侵染后刺葡萄果皮酵母双杂交cDNA文库构建 [J]. 福建农业学报,2020,35(12):1330−1335 doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2020.12.006
LEI Y, XIE Q, CHEN T, et al. Yeast Two-hybrid cDNA Library Constructed from Vitis davidii Föex Pericarps Infected by Grape Ripe Rot Pathogen, Colletotrichum viniferum [J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences,2020,35(12):1330−1335 doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2020.12.006
Citation: LEI Y, XIE Q, CHEN T, et al. Yeast Two-hybrid cDNA Library Constructed from Vitis davidii Föex Pericarps Infected by Grape Ripe Rot Pathogen, Colletotrichum viniferum [J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences,2020,35(12):1330−1335 doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2020.12.006

炭疽菌侵染后刺葡萄果皮酵母双杂交cDNA文库构建

doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2020.12.006
基金项目: 福建省农业科学院青年英才项目(YC2016-2);福建省农业科学院科技创新团队建设项目(STIT2017-3-6);国家现代农业产业技术体系建设专项(CARS-29)
详细信息
    作者简介:

    雷龑(1979−),男,博士研究生,副研究员,硕士生导师,主要从事果树育种与栽培技术研究(E-mail:lxmy2010@163.com

    通讯作者:

    陈清西(1964−),男,博士,教授,博士生导师,主要从事园艺植物栽培生理的教学和科研工作(E-mail:cqx0246@163.com

  • 中图分类号: S 435

Yeast Two-hybrid cDNA Library Constructed from Vitis davidii Fex Pericarps Infected by Grape Ripe Rot Pathogen, Colletotrichum viniferum

  • 摘要:   目的  炭疽病是南方葡萄的重要病害,刺葡萄是高抗炭疽病的重要野生葡萄资源,目前尚未见到关于葡萄炭疽菌侵染后的葡萄果皮酵母cDNA文库的报道。本文构建了葡萄炭疽菌侵染后刺葡萄果皮的酵母cDNA文库,为葡萄抗炭疽病分子机理研究提供材料基础。  方法  提取葡萄炭疽菌侵染后1、3、7 d的刺葡萄福安果皮总RNA,采用SMART的方法将总RNA反转录合成cDNA,使用试剂盒将cDNA纯化,随后将纯化产物(双链cDNA)酶切处理及短片段去除,获得质量良好的cDNA。将其克隆到 pGADT7三框质粒载体,经纯化精制,获得初级cDNA文库。对初级cDNA文库扩增后,提取文库质粒转化到Y187酵母菌中,制作扩增的酵母文库,并对酵母文库进行鉴定。  结果  经检测所构建的初级cDNA文库库容约为5.2×106 cfu,重组率约为97.92%,插入的片段长度主要分布在400~2000 bp,具有良好的多态性。进一步获得的Y187酵母文库滴度约为6.0×107 cfu·mL−1  结论  构建的葡萄炭疽菌诱导的刺葡萄果皮酵母cDNA文库质量符合酵母双杂交筛选要求,为筛选葡萄炭疽病侵染过程中的互作蛋白奠定基础。
  • 图  1  刺葡萄接种炭疽病菌后的RNA电泳检测

    注:M1: 250 bp DNA Ladder Marker; 泳道1~3: 总RNA。

    Figure  1.  RNA extracted from V. davidii pericarps infected by C. viniferum

    Note: M1: 250 bp DNA Ladder Marker; Lane 1-3: Total RNA.

    图  2  cDNA合成检测

    注:M1: 250 bp DNA Ladder Marker; 泳道1: 合成的cDNA。

    Figure  2.  Detection of cDNA

    Note: M1: 250 bp DNA Ladder Marker; Lane 1: cDNA before the purification.

    图  3  纯化后cDNA检测

    注:M1: 250 bp DNA Ladder Marker; 泳道1: 过柱纯化后cDNA。

    Figure  3.  Examination on purified cDNA

    Note:M1: 250 bp DNA Ladder Marker; Lane 1: Purified cDNA.

    图  4  酵母cDNA文库插入片段检测

    注:M1: 250 bp DNA Ladder Marker; 泳道1~48: 扩增的cDNA 插入片段。

    Figure  4.  Detection of inserted fragments in yeast cDNA library

    Note: M1: 250 bp DNA Ladder Marker; Lane 1-48: Amplified cDNA insert fragments.

    图  5  扩增文库质粒

    注:M2: Lambda Eco T14 I digest Marker; 泳道1: 文库质粒。

    Figure  5.  Amplified plasmid library

    Note: M2: Lambda Eco T14 I digest Marker; Lane 1: plasmid library.

    图  6  酵母cDNA文库菌液在SD/-Leu平板上的菌落生长情况

    Figure  6.  Clones of yeast cDNA library on SD/-Leu plate

    表  1  总RNA质量分析

    Table  1.   Quality of total RNA

    ODC2-1 Total RNAC2-2 Total RNAC2-3 Total RNA
    OD260/2802.122.122.12
    OD260/2302.182.182.18
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  • [1] OIV. 2019 Statistical report on world vitiviniculture [R/OL]. (2019-10-15) [2020-11-25]. http//www.oiv.intpublicmedias6782oiv-2019-statistical-report-on-world-vitiviniculture.pdf.
    [2] 贺普超, 任治邦. 我国葡萄属野生种对炭疽病抗性的研究 [J]. 果树科学, 1990, 7(1):7−12.

    HE P C, REN Z B. Study on the resistances of wild Vitis species native to China to grape ripe rot [J]. Joural of Fruit Science, 1990, 7(1): 7−12.(in Chinese)
    [3] SUZAKI K. Improved method to induce sporulation of Colletotrichum gloeosporioides, causal fungus of grape ripe rot [J]. Journal of General Plant Pathology, 2011, 77(2): 81−84. doi: 10.1007/s10327-011-0296-z
    [4] 赵奎华. 葡萄病虫害原色图鉴[M]. 北京: 中国农业出版社, 2006.
    [5] YAN J Y, JAYAWARDENA M M R S, GOONASEKARA I D, et al. Diverse species of Colletotrichum associated with grapevine anthracnose in China [J]. Fungal Diversity, 2015, 71(1): 233−246. doi: 10.1007/s13225-014-0310-9
    [6] LEI Y, TANG X B, JAYAWARDENA R S, et al. Identification and characterization of Colletotrichum species causing grape ripe rot in southern China [J]. Mycosphere, 2016, 7(8): 1177−1191. doi: 10.5943/mycosphere/si/2c/8
    [7] OO M M, OH S K. Identification and characterization of new record of grape ripe rot disease caused by Colletotrichum viniferum in Korea [J]. Mycobiology, 2017, 45(4): 421−425. doi: 10.5941/MYCO.2017.45.4.421
    [8] 王跃进, 徐炎, 张剑侠, 等. 中国野生葡萄果实抗炭疽病基因的RAPD标记 [J]. 中国农业科学, 2002, 35(5):536−540. doi: 10.3321/j.issn:0578-1752.2002.05.014

    WANG Y J, XU Y, ZAHNG J X, et al. Identification of RAPD markers linked to ripe rot resistant gene in wild grapes native to China [J]. Scientia Agricultura Sinica, 2002, 35(5): 536−540.(in Chinese) doi: 10.3321/j.issn:0578-1752.2002.05.014
    [9] 方中达. 植病研究方法[M]. 第3版. 北京: 中国农业出版社, 1998.
    [10] 雷龑, 林雄杰, 陈婷, 等. 福建葡萄炭疽病病原鉴定及致病性分析 [J]. 果树学报, 2014, 31(6):1123−1127, 1199.

    LEI Y, LIN X J, CHEN T, et al. Pathogen identification and pathogenicity analysis of grape ripe rot in Fujian [J]. Journal of Fruit Science, 2014, 31(6): 1123−1127, 1199.(in Chinese)
    [11] FIELDS S, SONG O K. A novel genetic system to detect protein-protein interactions [J]. Nature, 1989, 340(6230): 245−246. doi: 10.1038/340245a0
    [12] 程萍, 冯仁军, 袁克华, 等. 香蕉红素氧还蛋白酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定 [J]. 生命科学研究, 2009, 13(4):349−353.

    CHENG P, FENG R J, YUAN K H, et al. Construction and identification of yeast two-hybrid cDNA library of Musa acuminata rubredoxin (MaRD) [J]. Life Science Research, 2009, 13(4): 349−353.(in Chinese)
    [13] 苏玲, 李彬, 王青, 等. 金柑花蕾酵母双杂交cDNA文库构建及评价 [J]. 基因组学与应用生物学, 2019, 38(7):3169−3173.

    SU L, LI B, WANG Q, et al. Construction and evaluation of yeast two hybrid cDNA library of floral buds from Rongan kumquat [J]. Genomics and Applied Biology, 2019, 38(7): 3169−3173.(in Chinese)
    [14] 刘露露, 曲俊杰, 郭泽西, 等. 霜霉菌侵染后葡萄叶片酵母双杂交cDNA文库构建 [J]. 南方农业学报, 2020, 51(4):829−835.

    LIU L L, QU J J, GUO Z X, et al. Construction of a yeast two-hybrid cDNA library from Vitis vinifera leaves infected by downy mildew [J]. Journal of Southern Agriculture, 2020, 51(4): 829−835.(in Chinese)
    [15] 姜赟, 史自航, 付欣, 等. 番茄花柄脱落过程的酵母双杂交cDNA文库构建 [J]. 沈阳农业大学学报, 2018, 49(2):129−135.

    JIANG Y, SHI Z H, FU X, et al. The Construction of a yeast two-hybrid cDNA library of tomato pedicel during abscission. [J]. Journal of Shenyang Agricultural University, 2018, 49(2): 129−135.(in Chinese)
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出版历程
  • 收稿日期:  2020-11-12
  • 修回日期:  2020-11-29
  • 网络出版日期:  2020-12-10
  • 刊出日期:  2020-12-31

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