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甜瓜蔓枯病菌原生质体制备及再生体系研究

毛建才 王豪杰 李俊华 翟文强

毛建才,王豪杰,李俊华,等. 甜瓜蔓枯病菌原生质体制备及再生体系研究 [J]. 福建农业学报,2021,36(2):202−208 doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2021.02.010
引用本文: 毛建才,王豪杰,李俊华,等. 甜瓜蔓枯病菌原生质体制备及再生体系研究 [J]. 福建农业学报,2021,36(2):202−208 doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2021.02.010
MAO J C, WANG H J, LI J H, et al. Preparation and Regeneration of Didymella bryoniae Protoplasts [J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences,2021,36(2):202−208 doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2021.02.010
Citation: MAO J C, WANG H J, LI J H, et al. Preparation and Regeneration of Didymella bryoniae Protoplasts [J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences,2021,36(2):202−208 doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2021.02.010

甜瓜蔓枯病菌原生质体制备及再生体系研究

doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2021.02.010
基金项目: 新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(2018D01B26)
详细信息
    作者简介:

    毛建才(1989−),男,助理研究员,硕士,研究方向:西甜瓜病害与抗病育种(E-mail:mjc_fly@foxmail.com.)

    通讯作者:

    翟文强(1963−),男,研究员,研究方向:哈密瓜育种与栽培(E-mail:2291349053@qq.com

  • 中图分类号: S 435

Preparation and Regeneration of Didymella bryoniae Protoplasts

  • 摘要:   目的  建立高效的病原菌原生质体制备和再生体系,明确甜瓜蔓枯病菌的致病机理。  方法  采用单因素分析法,利用2种混合酶20 g·L−1 Driselase和8 g·L−1 Lysing enzymes,以不同菌龄、摇培转速、不同酶解时间、温度、渗透压稳定剂的种类及pH、再生培养基为研究条件;对甜瓜蔓枯病菌原生质体的制备及再生体系进行优化。  结果  结果表明:以培养36 h左右的菌丝体为材料,以0.7 mol·L−1 NaCl作为渗透压稳定剂(pH=7),用20 g·L−1 Driselase和8 g·L−1 Lysing enzymes在30 ℃、140 r·min−1条件下酶解4 h,原生质体的产量可达9.65×107个·mL−1;以琼脂含量为0.6%的SR培养基作为再生培养基,甜瓜蔓枯病菌的再生率可达22.53%;原生质体的再生率在存放10 h内下降迅速,10 h后下降速度逐渐平缓。  结论  确定了蔓枯病菌的高效原生质体制备与再生体系,为该菌株遗传转化体系的建立奠定基础。
  • 图  1  菌丝菌龄对原生质体产量的影响

    注: 不同的小写字母代表差异显著(P<0.05),下同

    Figure  1.  Effect of mycelium age on protoplast release by lysis

    Note: Data with different lowercase letters represent significant differences (P<0.05). Same for the following.

    图  2  酶解时间和酶解温度对原生质体产量的影响

    注: A: 酶解时间对原生质体产量的影响; B: 酶解温度对原生质体产量的影响

    Figure  2.  Effects of enzymatic digestion time and temperature on protoplast release by lysis

    Note: A: effect of enzymatic digestion time; B: effect of enzymatic digestion temperature.

    图  3  渗透压稳定剂对原生质体产量的影响

    注: A: 不同稳定剂对原生质体产量的影响; B: NaCl的浓度与原生质体产量的相关性

    Figure  3.  Effect of osmotic stabilizer on protoplast release by lysis

    Note: A: effects of different stabilizers; B: correlation between NaCl concentration and protoplast yield.

    图  4  pH和转速对原生质体产量的影响

    注: A: pH对原生质体产量的影响; B: 摇培转速与原生质体产量的相关性

    Figure  4.  Effects of pH and rotational speed on protoplast yield in lysis

    Note: A: effect of pH; B: effect of rotational speed.

    图  5  不同再生培养基对原生质体再生率的影响

    注: A: 不同再生培养基对原生质体再生的影响; B: 上层覆盖培养基含量与原生质体再生的相关性

    Figure  5.  Effects of medium and agar concentration on protoplast regeneration rate

    Note: A: effect of regeneration medium; B: effect of concentration of superstratum medium.

    图  6  酶解时间和存放时间对原生质体再生率的影响

    注: A: 酶解时间对原生质体再生率的影响; B: 保存时间与原生质体再生的相关性

    Figure  6.  Effects of enzymatic digestion time and storage time on protoplast regeneration rate

    Note: A: effect of enzymatic digestion time; B: effect of storage time.

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出版历程
  • 收稿日期:  2020-09-10
  • 修回日期:  2020-11-13
  • 网络出版日期:  2021-02-08
  • 刊出日期:  2021-02-28

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