鸭1型甲肝病毒亚型VP3基因的克隆与原核表达

黄剑梅; 傅秋玲; 傅光华; 万春和; 陈翠腾; 陈珍; 程龙飞; 施少华; 陈红梅; 黄瑜

doi:10.19303/j.issn.1008-0384.2015.05.001

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鸭1型甲肝病毒亚型VP3基因的克隆与原核表达

doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2015.05.001

1. 江西农业大学动物科学技术学院,江西南昌,330045;
2. 福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建福州,350013

基金项目:

福建省自然科学基金项目(2015J01113)

新世纪“百千万人才工程”国家级人选科研补助资金(NCNCMTPC-2009)

福建省科技计划项目——省属公益类科研院所基本科研专项(2014R1023-3)

现代农业产业技术体系建设专项(CARS-43)

国家自然科学基金项目(31472222)

详细信息

作者简介:
黄剑梅(1988-),女,硕士研究生,研究方向:预防兽医学(E-mail:hjianmei10@163.com);黄瑜(1965-),男,博士,研究员,研究方向:动物传染病学(E-mail:huangyu_815@163.com)

中图分类号: S852.65
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出版历程
- 收稿日期: 2015-04-01
- 刊出日期: 2015-05-18

Cloning and Prokaryotic Expression of VP3 Gene of Duck Hepatitis A Virus Type 1 Subtype

1. College of Animal Science and Technology,Jiangxi Agricultural University;
2. Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine,Fujian Academy of Agricultural Sciences

摘要

摘要: 参照鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)的基因组序列设计了1对VP3基因特异性扩增引物,通过RT-PCR方法扩增获得了DHAV-1a结构蛋白VP3基因,将纯化的VP3基因与pEASYTM-Blunt Zero Cloning Vector连接,构建DHAV-1aVP3基因克隆重组质粒,然后将VP3基因片段插入pET-32a(+)表达载体,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞。以1.0mmol·L-1 IPTG于37℃诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明VP3基因于大肠杆菌中成功表达,其分子量为47kDa,且表达的VP3蛋白能够与Anti-His Mouse mAb发生特异性反应,具有良好的生物活性,为进一步研究DHAV-1aVP3蛋白功能和以VP3蛋白为抗原研制DHAV-1a诊断试剂盒奠定基础。
- 鸭1型甲肝病毒亚型 /
- VP3基因 /
- 克隆 /
- 原核表达
Abstract: The VP3 gene of the hepatitis A virus type 1subtype(DHAV-1a)in ducks was amplified by the reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR)using one pair of specific primers designed according to the published sequences of DHAV-1a.The target DNA was purified and cloned into pEASYTM-Blunt Zero Cloning Vector.The recombinant expression plasmid,pET-32a-VP3,was constructed by inserting the target gene fragment into pET-32a(+)vector and transformed into Escherichia coli BL21(DE3)competent cells.In this study,SDSPAGE and Western-blot analyses showed that the recombinant protein VP3,approximately 47 kDa in molecular mass,was expressed highly in E.coli after pET-32a-VP3 was induced with 1.0mmol·L-1 IPTG at 37℃.The expressed recombinant protein was recognized specifically by Anti-His Mouse mAb showing agood bioactivity.
- duck hepatitis A virus type 1a /
- VP3gene /
- cloning /
- prokaryotic expression