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检测猪源牛病毒性腹泻病毒荧光RT-PCR方法的建立与监测分析

白泉阳 徐磊 傅光华 曾亮明 程龙飞 黄瑜

白泉阳, 徐磊, 傅光华, 曾亮明, 程龙飞, 黄瑜. 检测猪源牛病毒性腹泻病毒荧光RT-PCR方法的建立与监测分析[J]. 福建农业学报, 2017, 32(8): 828-832. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2017.08.004
引用本文: 白泉阳, 徐磊, 傅光华, 曾亮明, 程龙飞, 黄瑜. 检测猪源牛病毒性腹泻病毒荧光RT-PCR方法的建立与监测分析[J]. 福建农业学报, 2017, 32(8): 828-832. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2017.08.004
BAI Quan-yang, XU Lei, FU Guang-hua, ZENG Liang-ming, CHENG Long-fei, HUANG Yu. Establishment and Monitoring Analysis of Fluorescence RT-PCR for Detection of Bovine Viral Diarrhea Virus in Swine[J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2017, 32(8): 828-832. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2017.08.004
Citation: BAI Quan-yang, XU Lei, FU Guang-hua, ZENG Liang-ming, CHENG Long-fei, HUANG Yu. Establishment and Monitoring Analysis of Fluorescence RT-PCR for Detection of Bovine Viral Diarrhea Virus in Swine[J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2017, 32(8): 828-832. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2017.08.004

检测猪源牛病毒性腹泻病毒荧光RT-PCR方法的建立与监测分析

doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2017.08.004
基金项目: 

福建省高校杰出青年科研人才培育计划 闽教科[2015]54号

福建省畜禽疫病防控技术重大研发平台项目 2014N2003

福建省中青年教师教育科研项目计划 JA15760

福州市科技计划项目 2016-G-64

详细信息
    作者简介:

    白泉阳(1961-), 男, 高级兽医师, 主要从事动物检疫工作(E-mail:bqyciq@163.com)

  • 中图分类号: S852.65

Establishment and Monitoring Analysis of Fluorescence RT-PCR for Detection of Bovine Viral Diarrhea Virus in Swine

  • 摘要: 根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5'-UTR保守序列建立的特异性荧光RT-PCR,对采自福州市周边屠宰场的359份屠宰猪血清进行BVDV感染的病原学检测。结果待检的359份血清样品BVDV阳性52份,阳性率为14.5%(52/359)。对其中13份BVDV阳性样品5'端UTR片段进行序列测定分析,发现所测13份BVDV阳性样品5'端UTR片段均与VEDEVAC进化谱系较为密切,均为基因Ⅰ型。以上结果表明以牛源BVDV建立的特异性荧光RT-PCR方法适用于猪源BVDV感染的监测,并揭示福州市屠宰猪存在BVDV感染。
  • 图  1  BVDV实时荧光定量RT-PCR扩增结果

    注:P为阳性对照;N为阴性对照。

    Figure  1.  Real-time quantitative RT-PCR amplification of BVDV

    图  2  BVDV敏感性实时荧光定量RT-PCR扩增结果

    注:a~e为1×102.2~1×10-3.8TCID50/50 μL样品扩增曲线;g为阴性对照。

    Figure  2.  Susceptibility of real-time quantitative RT-PCR amplification of BVDV

    图  3  BVDV组间重复性实时荧光定量RT-PCR扩增结果

    注:a~e为组间重复样品扩增曲线;f为阴性对照。

    Figure  3.  Inter-group repeatability of real-time quantitative RT-PCR amplification of BVDV

    图  4  BVDV实时荧光定量RT-PCR扩增结果

    注:S1、S2为阳性样品扩增曲线;P为阳性对照;N为阴性对照。

    Figure  4.  Real-time quantitative RT-PCR amplification of BVDV

    图  5  BVDV 5′-UTR系统进化树

    Figure  5.  Phylogenetic tree of BVDV 5′-UTR fragments

    表  1  荧光RT-PCR反应体系

    Table  1.   The reaction system of Fluorescence RT-PCR

    成分 用量/μL
    10×RT-PCR buffer solution 2.5
    MgCl2(25 mmol·L-1) 5.0
    dNTP(10 mmol·L-1) 2.5
    RNasin(40 U·μL-1) 0.5
    AMV reverse transcriptase (5 U·μL-1) 0.5
    Taq DNA polymerase(5 U·μL-1) 0.5
    upstream primers(10 μmol·L-1) 0.5
    downstream primers(10 μmol·L-1) 0.5
    TaqMan probe(5 μmol·L-1) 0.5
    RNA 5.0
    RNase-Free water 7.0
    下载: 导出CSV
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出版历程
  • 收稿日期:  2017-06-02
  • 修回日期:  2017-07-14
  • 刊出日期:  2017-08-28

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