Differentiation between Reciprocal-crossed Hybrids of Dendrobium officinale and D.huoshanense Using SSR Markers
-
摘要: 以铁皮石斛与霍山石斛的正、反交F1代共63株为试验材料，利用SSR标记鉴定杂种真实性。结果表明，在21对石斛基因组引物中，筛选出双亲多态性引物3对，多态性引物占比为14.3%。用此3对引物可鉴定出铁皮石斛×霍山石斛杂交苗中25株真杂种，比例为78.1%，可鉴定出霍山石斛×铁皮石斛杂交苗中28株真杂种，比例为90.3%。Abstract: The authenticity of hybrids created by reciprocal crossing between Dendrobium officinale and D. huoshanense was not always apparent. To resolve the confusion, this study applied SSR markers to differentiate them among 63 F1 generation of the hybrids. Three out of 21 pairs of the SSR primers were found to have polymorphic bands, i.e., 14.3% of all, in the parental lines. By using these 3 pairs of primers, 25 out of 32 known (D. officinale×D. huoshanense) hybrids were correctly identified rendering a positive identification rate of 78.1%; while, 28 out of 31 known (D. huoshanense×D. officinale) hybrids were positively identified with a rate of 90.3%.
-
Key words:
- Dendrobium officinale /
- Dendrobium huoshanense /
- reciprocal cross /
- SSR /
- hybrid identification
-
图 1 引物DM199对霍山石斛×铁皮石斛杂种苗扩增结果
注：M为Mark; ♀为霍山石斛; ♂为铁皮石斛; 1~32为杂交实生苗。图 2同。
Figure 1. Amplification of primer DM199 in F1 (D. huoshanense×D. officinale) hybrid
图 2 引物DM186对铁皮石斛×霍山石斛杂种苗扩增结果
Figure 2. Amplification of primer DM199 in F1 (D. officinale×D. huoshanense)hybrid
表 1 用于SSR标记的引物序列
Table 1. Sequences of SSR primers
引物名称 上游引物
(5′-3′)下游引物
(5′-3′)目标片段长度
/bpDR31 AGAGGGAGAGTGCAAGAG CGCTATTTCCATCCCTCC 219~230 OA07 CCTATCCGAGGAGAACCATAA AAGCTTTGAGATTCTTTTGTGACT 160~174 OA08 AGGCAAAATATAACATACCTCAAT AATCAAGCCATTTATCTCCTCT 166~180 OA12 GCATTCTTTTGCCTAATTCAGGAA TCCACCCTTTCATCCAAATACTTC 163~287 OA15 ACAGCGTTAACATAAACCATAAGC CTGCCCGCAGATTCAGC 221~277 OA18 GGAACGGAGAAGATTAAGACAACC TGCCCTCACATGCCGTATT 179~217 OA20 CATATATTAGCCACTTCACTCTC ATGTCCACCTCCCTAAAATAGTA 222~266 OA24 GAGCAACGGGAGGGATAGAGATAT ACCTCTGTCTCCCTCTTGTCCATC 313~351 OA25 GGAAGGGCCTAAGTGGATG GCGTACCATGCTTAACATTCA 139~181 S122 GTGACTCGAGCCTTGGAATACG ACGCCGGTGAAAGAAGAAGAG 187~205 S130 CTCATGCATAAATTTAGGGTAGA ACAACACGAACAAGTAGTCATC 310~328 DM2 GAGTCGTAAGAGGCGAGTTGT AATGGATGGTATCTATGTCCGTAT 276~310 DM3 CTCCGGCGCTAGCTGTTGC TCACTTGCGGATGGGGAGC 178~200 DM88 AGCATTTTGAGATGGGATGATC ATTGTCCTCGCCGATATGAGTA 190~230 DM81 CTCCAATACCGATATGCTG TCGGCTACAGGTAAGTGG 100~115 DM123 ATAGTGGGATAAAGGCTTG ATCAGTATCCACAACATTTA 180~210 DM137 CTGACTGAGGTGCAGAGGTTTG CCTGATGATGAGTATGAAGAGCC 130~160 DM178 TCCTCCAGCTTAACACCATCA CGCCACCCTACACTAAGAAAA 290~310 DM186 GCCTTCTACAGCACGGGTCT GGAATCTGAAACCAGGAGGC 180~280 DM198 AAAAGCACTCAAAGACAAAATCAA GATGAGTGAGGGATGGGTGC 210~270 DM199 GTGTCTGCCCGAGTAAAAGC AGCTCACGGTTACCAGGTCT 216~235 
下载: 导出CSV
表 2 可扩增具有父本特征SSR引物
Table 2. SSR markers with special bands from male parent
杂交组合 引物 总株数 具有父本特征的株数 真杂种率/% 霍山石斛铁×皮石斛 DM178 32 14 43.8 Dendrobium huoshanense×Dendrobium officinale DM186 32 12 37.5 DM199 32 23 71.9 小计 32 25 78.1 铁皮石斛×霍山石斛 DM178 31 15 48.4 Dendrobium officinale×Dendrobium huoshanense DM186 31 12 38.7 DM199 31 23 74.2 小计 31 28 90.3
下载: 导出CSV
-
[1] 吴庆生.中药霍山石斛的微量元素分析及TE图谱鉴定[J].微量元素与健康研究, 1995, (12):31-32. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-WYJK501.016.htm [2] 李秀芳. 霍山石斛和四种药典石斛多糖降血糖活性比较研究[D]. 合肥: 合肥工业大学, 2012. http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10359-1012520909.htm [3] 吴胡琦, 罗建平.霍山石斛的研究进展[J].时珍国医国药, 2010, (1):208-211. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-SZGY201001103.htm [4] LUO J, HOU B W, NIU Z T, et al. Comparative chloroplast genomes of photosynthetic orchids:insights into evolution of the Orchidaceae and development of molecular markers for phylogenetic applications[J]. PLoS One, 2014, 9(6):e99016. doi: 10.1371/journal.pone.0099016 [5] 何伯伟, 潘慧锋.浙江铁皮石斛产业提升发展的实施措施与建议[J].浙江农业科学, 2014, (2):152-155. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZJNX201402003.htm [6] 樊秀彩, 张颖, 姜建福.SSR分子标记鉴定山葡萄和河岸葡萄种间杂种[J].西北植物学报, 2012, 32(11):2195-2200. doi: 10.3969/j.issn.1000-4025.2012.11.008 [7] 朱骏驰, 郭印山, 刘镇东.利用SSR分子标记鉴定葡萄F1代杂种[J].沈阳农业大学学报, 2016, 47(2):148-152. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-SYNY201602005.htm [8] 吴妙丹, 董方娟, 汤定软. 4个丛生杂种竹的SSR分子鉴定[J].分子植物育种, 2009, 7(5):959-965. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-FZZW200905026.htm [9] 李晓辉, 李新海, 高文伟, 等.玉米杂交种DNA指纹图谱及其在亲子鉴定中的应用[J].作物学报, 2005, 31(3):386-391. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-XBZW200503018.htm [10] 邱道寿, 郑希龙, 蔡时可, 等.石斛SSR标记的开发及可转移性分析[J].植物科学学报, 2013, 3(5):500-509. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-WZXY201305010.htm [11] 任羽, 王呈丹, 徐世.石斛兰亲缘关系的SSR分析[J].热带作物学报, 2013, 34(7):1252-1256. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-RDZX201307011.htm [12] 刘昔辉, 方锋学, 高铁静, 等.斑茅割手密杂种后代真实性鉴定及遗传分析[J].作物学报, 2012, 38(5):914-920. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-XBZW201205024.htm [13] 张婧, 黄琳凯, ZHAO B-Y, 等.SPAR与SSR分子标记在柳枝稷杂种鉴定中的比较分析[J].草业学报, 2012, 21(5):128-133. doi: 10.11686/cyxb20120516 [14] 房经贵, 章镇, 马正强, 等, AFLP标记在两个芒果品种间杂交Fl代的多态性及分离方式[J].中国农业科学, 2000, 33(3):19-24. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZNYK200003003.htm [15] 韩国辉, 向素琼, 汪卫星, 等.沙田柚杂交后代群体的SSR鉴定与遗传多样性分析[J].中国农业科学, 2010.43(22):4678-4686. doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.22.015 -
点击查看大图
图(2) / 表(2)
计量
- 文章访问数: 1579
- HTML全文浏览量: 187
- PDF下载量: 192
- 被引次数: 0
