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中国水仙NtCCHC锌指蛋白基因的克隆与原核表达

邹晖 李海明 王伟英 林江波

邹晖, 李海明, 王伟英, 林江波. 中国水仙NtCCHC锌指蛋白基因的克隆与原核表达[J]. 福建农业学报, 2019, 34(8): 889-893. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2019.08.004
引用本文: 邹晖, 李海明, 王伟英, 林江波. 中国水仙NtCCHC锌指蛋白基因的克隆与原核表达[J]. 福建农业学报, 2019, 34(8): 889-893. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2019.08.004
ZOU Hui, LI Hai-ming, WANG Wei-ying, LIN Jiang-bo. Cloning and Prokaryotic Expression of NtCCHC in Narcissus tazetta var. chinensis[J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2019, 34(8): 889-893. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2019.08.004
Citation: ZOU Hui, LI Hai-ming, WANG Wei-ying, LIN Jiang-bo. Cloning and Prokaryotic Expression of NtCCHC in Narcissus tazetta var. chinensis[J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2019, 34(8): 889-893. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2019.08.004

中国水仙NtCCHC锌指蛋白基因的克隆与原核表达

doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2019.08.004
基金项目: 

福建省财政专项——福建省农业科学院科技创新团队建设项目 STIT2017-2-11

详细信息
    作者简介:

    邹晖(1982—), 男, 研究实习员, 主要从事园艺作物研究(E-mail:21880338@qq.com)

    通讯作者:

    林江波(1976—), 男, 硕士, 副研究员, 主要从事农业生物技术研究(E-mail:linjianbo1976@yahoo.com.cn)

  • 中图分类号: S682

Cloning and Prokaryotic Expression of NtCCHC in Narcissus tazetta var. chinensis

  • 摘要:   目的  利用建立的多效唑诱导中国水仙的SSH文库,克隆中国水仙NtCCHC锌指基因的cDNA序列,进行原核表达,为深入研究NtCCHC锌指基因在中国水仙中的功能奠定基础。  方法  采用Trizol法提取多效唑处理后的中国水仙叶片总RNA,反转录成cDNA后,根据已知的CCHC锌指蛋白基因序列设计引物进行基因克隆和同源性分析,并构建原核表达载体进行诱导表达。  结果  克隆一段810bp的cDNA编码区序列,编码269个氨基酸,同源性分析表明与多个物种的CCHC基因存在着较高的同源性,命名为NtCCHC。该基因能成功在pGEX-4T-3原核表达载体上实现诱导表达,系统进化树分析表明:NtCCHC与中国莲遗传距离最近。  结论  克隆了中国水仙NtCCHC基因序列,并成功诱导表达。
  • 图  1  中国水仙NtCCHC PCR电泳检测

    注:M为Marker;1、2为NtCCHC基因。

    Figure  1.  PCR electrophoresis of NtCCHC in N.tazetta var.

    Note:M:Marker; 1, 2:NtCCHC.

    图  2  NtCCHC基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列

    Figure  2.  DNA and deduced amino acid sequences of NtCCHC

    图  3  中国水仙NtCCHC基因的系统进化树的构建

    Figure  3.  Construction of phylogenetic tree for NtCCHC in N.tazetta var.

    图  4  pGEX-NtCCHC的酶切鉴定

    注:M为Marker; 1为酶切pGEX-NtCCHC

    Figure  4.  Enzyme digestion identification of pGEX-NtCCHC

    Note:M:Marker; 1:restriction enzyme pGEX-NtCCHC

    图  5  NtCCHC基因诱导表达蛋白SDS-PAGE鉴定

    注:泳道M为标准蛋白分子量; 泳道1为诱导前;2为诱导后。

    Figure  5.  SDS-PAGE identification of NtCCHC-induced expression protein

    Note: M:protein marker; 1:Before induction; 2:After induction.

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出版历程
  • 收稿日期:  2019-03-07
  • 修回日期:  2019-07-18
  • 刊出日期:  2019-08-01

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