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长裙竹荪菌丝体凝集素的分离纯化及其理化性质

林勇 刘俊锋 唐小峦 张月芬 戴雅彬

林勇,刘俊锋,唐小峦,等. 长裙竹荪菌丝体凝集素的分离纯化及其理化性质 [J]. 福建农业学报,2019,34(11):1342−1346. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2019.11.015
引用本文: 林勇,刘俊锋,唐小峦,等. 长裙竹荪菌丝体凝集素的分离纯化及其理化性质 [J]. 福建农业学报,2019,34(11):1342−1346. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2019.11.015
LIN Y, LIU J F, TANG X L, et al. Purification and Characterization of a Lectin from Dictyophora indusiata Mycelia [J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences,2019,34(11):1342−1346. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2019.11.015
Citation: LIN Y, LIU J F, TANG X L, et al. Purification and Characterization of a Lectin from Dictyophora indusiata Mycelia [J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences,2019,34(11):1342−1346. doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2019.11.015

长裙竹荪菌丝体凝集素的分离纯化及其理化性质

doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2019.11.015
基金项目: 福建省科技计划公益类专项(2015R1020-4);福建省科技特派员项目(闽财指[2019]476号)
详细信息
    作者简介:

    林勇(1970−),男,副研究员,研究方向:天然产物研究与应用(E-mail:lforesty@163.com

  • 中图分类号: S 646

Purification and Characterization of a Lectin from Dictyophora indusiata Mycelia

  • 摘要:   目的  凝集素是竹荪的一类生理活性物质,为进一步明确其药用功效,开展了长裙竹荪凝集素理化性质研究。  方法  长裙竹荪菌丝体通过生理盐水抽提、20%~75%饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose和SephadexG-100柱层析纯化得到长裙竹荪菌丝体凝集素(DIL);并通过血细胞凝集活性、糖抑制试验、酸碱稳定性、热稳定性分析以及金属离子等因素来测定长裙竹荪菌丝体凝集素的理化性质。  结果  经PAGE显示单一条带,测得其亚基相对分子质量为43.6 kDa。该凝集素对供试的鸽、兔、鸭和鸡血红细胞具有凝集作用,对兔红细胞的凝集作用可被D-半乳糖和N-乙酰胺基-葡萄糖所抑制。长裙竹荪凝集素对热不稳定,经50℃处理10 min,活性明显降低;该凝集素在pH 4.0~8.0都保持着较高的凝集活性,其凝血活性依赖于Ca2+和Mg2+二价金属离子,Mn2+和Zn2+则无影响。  结论  长裙竹荪菌丝体凝集素对动物血红细胞具有较好的凝集活性,而且凝集活性需要在一定浓度的Ca2+和Mg2+才会起作用。
  • 图  1  长裙竹荪菌丝体凝集素的DEAE-Sepharose Fast Flow层析

    Figure  1.  DEAE-Sepharose fast flow chromatography of DIL

    图  2  长裙竹荪菌丝体凝集素的Sephadex G-100柱层析

    Figure  2.  Sephadex G-100 chromatography of DIL

    图  3  长裙竹荪菌丝体凝集素的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

    Figure  3.  SDS-PAGE of DIL

    表  1  长裙竹荪菌丝体凝集素的凝血活性

    Table  1.   Agglutinating activity of DIL

    血细胞 Hemocyte 凝集活性 Agglutinating activity
    鸽血 Pigeon blood 210
    兔血 Rabbit blood 29
    鸭血 Duck blood 28
    鸡血 Chicken blood 23
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    表  2  长裙竹荪菌丝体凝集素对单糖的抑制作用

    Table  2.   Inhibition of DIL agglutinating activity by sugars

    单糖种类 Monosaccharide types 凝集活性 Agglutinating activity
    D-半乳糖 D-galactose 23
    D-甘露糖 D-mannose 210
    D-海藻糖 D-trehalose 210
    L-鼠李糖 L-rhamnose 210
    L-阿拉伯糖 L-arabinose 210
    N-乙酰胺基-葡萄糖 N-acetamino-glucose 25
    注:样品起始质量浓度为10 mg·mL−1
    Note: The initial concentration of the sample was 10 mg·mL−1.
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    表  3  pH对长裙竹荪菌丝体凝集素凝集活性的影响

    Table  3.   Effect of pH on DIL agglutinating activity

    pH 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0
    凝集活性 Agglutinating activity 28 211 211 210 210 210 28 27
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    表  4  温度对长裙竹荪菌丝凝集活性的影响

    Table  4.   Effect of temperature on DIL agglutinating activity

    温度Temperature 长裙竹荪菌丝体凝集素含量
    Lectin content of Dictyophora indusiata mycelium/(μg·mL−1
    1 000 500 250 125 62.5
    30℃ + + + + +
    40℃ + + + + +
    50℃ + + +
    60℃ + + +
    70℃
    80℃
    90℃
    100℃
    注:“+” 凝集;“−” 不凝集。
    Note: “+” indicates agglutination, “−”no agglutination.
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    表  5  金属离子对长裙竹荪菌丝体凝集素凝集活性的影响

    Table  5.   Effect of metal ions on DIL agglutinating activity

    处理方式 Treatment 凝集活性 Agglutinating activity
    未经处理 Untreated 29
    经EDTA处理 EDTA treated
    处理后加10 mmol·L−1 Ca2+
    After treatment with 10 mmol·L−1 Ca2+
    28
    处理后加10 mmol·L−1L Zn2+
    After treatment with 10 mmol·L−1 Zn2
    处理后加10 mmol·L−1 Mg2+
    After treatment with 10 mmol·L−1 Mg2+
    27
    处理后加10 mmol·L−1 Mn2+
    After treatment with 10 mmol·L−1 Mn2+
    注:凝集素初始质量浓度10 mg·mL−1;“−” 不凝集。
    Note: Initial DIL concentration=10 mg·mL−1; “−” indicates no agglutination.
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出版历程
  • 收稿日期:  2019-10-30
  • 修回日期:  2019-11-15
  • 刊出日期:  2019-11-01

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