“十二五”期间国家对污染物的排放实施主要污染物排放总量控制，对畜禽养殖业的继续快速发展提出更高要求，在增加生猪生产的同时减少污染物(特别是氮、磷) 排放。生猪饲养过程中产生的大量粪便和污水成为制约生猪产业发展的关键因素。发酵床养殖方式是一种污染物“零排放”的养殖新模式，是以接种益生菌与猪粪中正常菌群构成发酵床的优势菌群，以椰壳、谷壳为发酵床垫料，在发酵床原位降解消纳粪尿的一种“零污染”养殖模式，是养殖业污染治理的一项革新技术。大栏微生物发酵床微生物发酵菌是非特异性免疫调节因子，是良好的免疫激活剂，能增强巨噬细胞的活性，刺激机体免疫系统产生α、β、γ、ω等几种干扰素(IFN)^[1]。IFN能诱导机体细胞对病毒感染产生抗性，通过干扰病毒基因转录或病毒蛋白组分的翻译，从而阻止或限制病毒感染。鲜凌瑾等^[2]研究发现，微生物发酵床养殖模式能显著提高猪体血清的总蛋白、白蛋白和丙氨酸氨基转移酶浓度(P<0.05)，有研究表明^[3]，发酵床养殖模式也能大大提高猪血清的总胆固醇(CH)(24.71%)，碱性磷酸酶(ALP或AKP)提高了48.04%。周玉刚等^[3]研究发现，在微生物发酵床养殖模式中，猪血液尿素(UR)和低密度脂蛋白(LDL)的含量明显降低(P<0.05)，高密度脂蛋白(HDL)明显升高(P<0.05)。至目前为止，关于微生物发酵床养猪模式对肉猪的血液和生化指标的积极作用已有较多报道^{[4, 5, 6, 7, 8, 9, 10]}，但都是集中在小栏发酵床模式，最多是60头的小样本模式，属于试验性研究模式。关于微生物发酵床养猪模式对育肥猪免疫力的改善作用在实际生产中的应用、大栏微生物发酵床养殖模式是否能够提高育肥猪的免疫力、增强猪的生长机能等目前尚未见报道。因此，本研究旨在探讨大栏微生物发酵床养猪模式对育肥猪血液生化及免疫指标的影响，为大栏微生物发酵床养猪模式的生产应用提供科学依据。

微生物发酵床中所用的微生态制剂由福建省农业科学院农业生物资源所研制提供,其中的菌液主要包括短芽孢杆菌和酵母菌等。

微生物发酵床主要原料是椰壳粉，由厦门江平公司提供。垫料组成比为椰壳粉∶谷壳=7∶3。

将微生态制剂按10³ 倍稀释，与新垫料混匀，保证垫料的湿度在45%~55%，然后起堆发酵7 d，铺平，发酵床的垫料使用厚度是80 cm，待表面温度降到40℃时进猪。

本试验在福清某大栏微生物发酵床养殖基地进行，试验时间为120 d。试验动物为2 000头“杜×长×大”三元杂交商品猪，体况良好日龄相近，体重为(30±3)kg。

将试验猪随机分为试验组和对照组，每组1 000头，分别饲养于微生物发酵床猪舍和传统水泥地面猪舍(隔壁猪舍)。

试验组和对照组均饲喂全价平衡颗粒饲料，由某饲料有限公司生产，其配方及营养成分见表 1。

表 1(Tab.1)

表 1 基础日粮配方及营养成分含量 Tab.1 Composition and nutrient level of basal diets 项目 30~60 kg 60~120 kg 玉米/% 65 65 麸皮/% 10 13 豆粕/% 20 17 预混料/ % 5 5 总计/% 100 100 消化能 D E/(MJ·kg-1) 12.97 12.97 粗蛋白 CP/% 16.4 14.5 赖氨酸 Lys/% 0.82 0.7 钙 Ca/% 0.55 0.7 有效磷 AP/% 0.45 0.4

表 1 基础日粮配方及营养成分含量 Tab.1 Composition and nutrient level of basal diets

按常规免疫和饲养管理，试验猪均为自由采食，自由饮水。

试验结束时按体重相近的原则从试验组和对照组中各选取6头育肥猪，空腹从前腔静脉采血20 mL，分装于2支离心管，将其中10 mL加入抗凝剂，采用IDEXX全自动生化分析仪检测。另外10 mL血样置于37℃温箱30 min，待血清析出后，吸取血清于离心管中，1 000 r·min^-1离心10 min，制备血清样品，分装于1.5 mL离心管中，于-20℃冰箱中保存，供分析测试用。碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酐(CREA)、 淀粉酶(AMYL)、胆固醇(CHO)、血糖(GLU)和血清尿素氮(SUN)采用速率法测定、球蛋白(GLOB)、总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)用终点法测定、 磷(PHOS)、钙离子(Ca )含量等采用终点法测定。血清中免疫球蛋白(IｇA、IｇM、IｇG)采用免疫生化分析仪(美国贝克曼公司，试剂盒为北京天根生物公司产品)测定。采用酶联免疫方法测定(试剂盒为IDEXX公司产品)猪瘟抗体。

试验数据用SPSS 16.0软件进行分析。

由表 2可知，与对照组相比，大栏微生发酵床养猪模式组的总蛋白含量降低4.8%(P<0.05)，白蛋白含量降低8%(P>0.05)，球蛋白含量升高3.3%(P<0.05)，淀粉酶增加21.4%(P<0.01)，血清碱性磷酸酶活性提高0.86%(P>0.05)，丙氨酸转移酶活性降低33.8%(P<0.01)。与对照组相比，发酵床组中血清尿素氮含量降低39.8%(P<0.01)，总胆固醇含量增加9.4%(P<0.05)，总胆红素增加36.4%，血糖降低41.4%(P<0.01)。与传统水泥地面养殖模式相比，大栏微生物发酵床养殖模式增加了总蛋白、球蛋白、总胆固醇、总胆红素含量，增强了淀粉酶、碱性磷酸酶的活性；降低了白蛋白、血清尿素氮、血糖浓度，降低了丙氨酸酶的活性。

表 2(Tab.2)

表 2 两种不同养殖模式对育肥猪血液生化指标的影响 Tab.2 Effects of two different culture mode on the blood parameters of fattening pigs 注：同行数据后不同大、小写字母分别表示差异极显著(P<0.01)或差异显著(P<0.05)。 项目 试验组 对照组 正常范围 增减/% ALB (白蛋白)/(g·L-1) 34.5±0.32 Aa 37.5±0.36 Aa 18~33 -8 TP (总蛋白) /(g·L-1) 79±0.56 Aa 83±0.48 Ab 60~80 -4.8 ALKP (碱性磷酸酶) /(U·L-1) 123±0.43 Aa 122±0.47 Aa 92~294 0.8 ALT (丙氨酸氨基转移酶) /(U·L-1) 48±0.27 Aa 72.5±0.58 Bb 9~43 -33.8 TBIL (总胆红素) /(μmol·L-1) 7.5±0.04 Aa 5.5±0.69 Aa 2~5 36.4 SUN (血清尿素氮) /(mmol·L-1) 3.55±0.08 Aa 5.9±0.99 Bb 2.1~10.7 -39.8 CREA (肌酐) /(μmol·L-1) 139.5±0.89 Aa 137.5±0.35 Aa 44~186 1.5 Ca (钙离子) /(mmol·L-1) 2.805±0.74 Aa 2.86±0.05 Aa 1.62~2.85 -2.1 PHOS (磷) /(mmol·L-1) 2.55±0.38 Aa 2.685±0.71 Aa 1.16~2.97 -5.2 AMYL (淀粉酶) /(U·L-1) 925±0.25 Aa 762±0.08 Bb 271~1198 21.4 GLU (血糖) /(mmol·L-1) 3.75±0.21 Aa 6.4±0.11 Bb 4.72~8.89 -41.4 CHOL (胆固醇) /(mmol·L-1) 2.90±0.31 Aa 2.65±0.54 Ab 0.47~2.04 9.4 GLOB (球蛋白) /(g·L-1) 44.5±0.97 Aa 46±0.03 Ab -3.3

表 2 两种不同养殖模式对育肥猪血液生化指标的影响 Tab.2 Effects of two different culture mode on the blood parameters of fattening pigs

由表 3可知，与对照组相比，大栏微生发酵床组的IgA含量增加了34.05%(P<0.01)，IgG含量提高了21.6%(P<0.01)，IgM含量提高了17.3%(P<0.05)。说明大栏微生发酵床养猪模式组的猪群免疫指数比对照组明显提高。

表 3(Tab.3)

表 3 两种不同养殖模式对育肥猪免疫指标的影响比较 Tab.3 Comparison of two different culture mode on immune index of fattening pigs 免疫球蛋白 试验组 对照组 增比/% IgA/(g·L-1) 0.185±0.79 Aa 0.138±0.37 Bb 34.05 IgG/(g·L-1) 3.38±0.27 Aa 2.78±0.09 Bb 21.60 I gM/(g·L-1) 0.95±0.38 Aa 0.81±0.72 Ab 17.3

表 3 两种不同养殖模式对育肥猪免疫指标的影响比较 Tab.3 Comparison of two different culture mode on immune index of fattening pigs

由表 4可知，大栏微生发酵床养猪模式组的120 d猪瘟抗体效价比60 d的平均增比为46.5%，而对照组的平均增比为9.5%，试验组比对照组抗体效价增比显著增加 (P<0.05)。说明大栏微生发酵床养猪模式对疫苗免疫接种的反应敏感，产生的抗体水平高于对照组。

表 4(Tab.4)

表 4 不同养殖模式对猪瘟抗体效价的影响 Tab.4 Effect of different cultivation patterns on the swine fever antibody titer 样本 试验组60 d阻断率 试验组120 d阻断率 增比/% 对照组60 d阻断率 对照组120 d阻断率 增比/% 1 0.45±0.71 0.73±0.37 62.2 0.39±0.23 0.55±0.54 41 2 0.78±0.27 1.18±0.11 51.3 0.65±0.74 0.78±0.21 20 3 0.83±0.39 1.07±0.59 28.9 0.74±0.07 0.87±0.44 17.6 4 0.58±0.04 0.98±0.02 69.0 0.98±0.03 0.91±0.01 -7.1 5 0.75±0.79 1.12±0.57 49.3 0.95±0.19 1.02±0.27 7.4 6 0.65±0.45 0.77±0.32 18.4 0.78±0.13 0.61±0.05 -21.8

表 4 不同养殖模式对猪瘟抗体效价的影响 Tab.4 Effect of different cultivation patterns on the swine fever antibody titer

动物体内的蛋白质和脂类的代谢效率可通过动物血液中酶的变化反映出来。作为机体内具有遗传标记的碱性磷酸酶，它的活性变化和体内的脂肪代谢效率成正相关。有研究表明，血液中谷丙转氨酶活性的升高可作为应激反应的一个标志^[11]。本研究发现，大栏微生发酵床养猪模式组与普通水泥地板组相比，血清碱性磷酸酶活性提高0.86%(P>0.05)，丙氨酸转移酶活性降低33.8%(P<0.01)。表明大栏微生发酵床养猪模式组猪体的蛋白质和脂类的代谢效率都比对照组好，而且还可减少对猪的应激，改善动物福利。有研究认为，动物体内蛋白质代谢和氨基酸之间的平衡状况的变化可以通过血清尿素氮量化变化反映出来^{[12, 13]}。仔猪血浆中体内糖和脂肪代谢情况也可通过GLU和TG变化表现出来。本研究中的大栏微生发酵床养猪模式组的血清尿素氮含量降低39.8%(P<0.01)，总胆固醇含量增加9.4%(P<0.05)，总胆红素增加36.4%(P>0.05)，血糖降低41.4%(P<0.01)，表明大栏微生物发酵床养猪模式对于育肥猪体内糖、蛋白质代谢和氨基酸代谢有很好的调节和促进作用。大栏微生物发酵床饲养模式能够提高育肥猪对葡萄糖和脂肪的转化与利用效率。

动物体内的免疫球蛋白 (Immunoglobulin，Ig)，是血清主要的抗体成分，动物免疫系统受到外来的抗原(如病毒、细菌)刺激后，体内的B淋巴细胞迅速激发浆细胞产生能与相应的抗原发生特异性结合的抗体蛋白质。动物体内的免疫球蛋白包括IgG、IgA、IgM，其中IgG占Ig总量的70%~80%，一半分布在血液中，另一半分布在组织中。IgG在抗原抗体反应中起着重要作用。盛清凯等^[14]研究发现，微生物发酵床生态养殖模式猪血清中IgG浓度的含量为3.33 g·L^-1(P<0.05)，显著高于水泥地面的养殖模式，而血清IgM浓度无显著差异(P>0.05)。张灵启等^[9]研究发现，添加芽胞杆菌能显著提高血清IgA和IgM的含量。李春丽等^[10]在应用微生态制剂对母乳免疫球蛋白(IgA)水平研究中发现，IgA一直保持不变，而对照组的母乳免疫球蛋白(IgA)水平下降了4.2%，小猪的发病率明显降低。本研究发现，与对照组相比，大栏微生发酵床养猪模式组的IgA(g·L^-1)含量增加了34.05%(P<0.01)，IgG(g·L^-1)含量提高了21.6%(P<0.01)，IgM(g·L^-1)含量提高了17.3%(P<0.05)。由此可见，微生态制剂有促进动物生长和增强免疫力的作用。

大栏微生物发酵床的益生菌可刺激机体的免疫系统的发育，提升体内细胞免疫的功能，具有免疫刺激因子的作用。微生态制剂，作为一种外来物，能激发机体的免疫反应，其功能相当于一种免疫佐剂，对机体的黏膜免疫和其他的体液免疫有促进作用。卢胜明^[15]、赵希彦^[16]等利用微生态饲料添加剂来饲喂雏鸡，结果发现添加微生态饲料组的新城疫抗体效价和体内各免疫器官指数均显著高于对照组 。但是尹德明研究发现，微生物发酵床生态养殖模式养猪对猪瘟免疫效果影响差异不显著^[17]。本研究发现由大栏微生发酵床养猪模式组的猪瘟抗体效价的比对照组抗体效价增加显著(P<0.05)。证明微生发酵床的益生菌可以提高黏膜免疫和疫苗抗体水平增强机体抵抗力，减少疫病的发生。

本研究结果表明，大栏微生物发酵床饲养方式可以改善猪体内的糖、蛋白质和脂肪的代谢，降低猪的应激，提高猪的免疫力，增强抗病能力。