我国中草药资源丰富，种类繁多，通过一定工艺制成饲料添加剂在畜禽生产中运用，能够增强动物机体免疫功能，具有提高动物机体抗病能力、抗应激能力等特点^{[1, 2, 3]}。目前关于中草药作为免疫增强剂方面的研究主要是单方制剂，如中药木鳖子提取物和口蹄疫疫苗混合使用能使抗体效价升高，有效期延长，黄芪也能提高仔猪免疫抗体水平^{[4, 5]}。猪繁殖与呼吸综合征病毒对巨噬细胞，特别是肺泡巨噬细胞有极强的亲嗜性，并在其内大量复制，破坏巨噬细胞而导致机体免疫抑制，并伴发其他疾病^{[6, 7]}。替米考星能增加巨噬细胞溶菌酶的产生量，从而增强巨噬细胞的杀菌能力。替米考星单独作用于猪繁殖与呼吸综合征病毒时，对猪繁殖与呼吸综合征病毒的活性没有任何影响，但肺泡巨噬细胞与替米考星作用后再接种猪繁殖与呼吸综合征病毒时，猪繁殖与呼吸综合征病毒的复制会被影响，且具有剂量依赖性，但并不会影响猪只针对猪繁殖与呼吸综合征毒的抗体反应^[8]。本试验通过研究自拟复方中草药以及替米考星对仔猪免疫功能的影响效果，同时对其添加剂量与免疫功能相关性进行研究，为复方中草药以及替米考星今后在养殖业中的应用提供理论基础和参考依据。

自拟复方中草药主要成分：黄芪、党参、马齿苋、淫羊藿、神曲、白术、麦芽、甘草、当归、山楂，购自福建永惠医药连锁有限公司。主要功能为解表散寒、疏理气机、免疫增强。经500 目超微粉碎处理后应用。替米考星购自浙江海正药业股份有限公司，粉剂。猪繁殖与呼吸综合征病毒活疫苗(CH-1R株)(批号为[2011]130141063)，购自福州大北农生物技术有限公司；猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒(ELISA)，购自美国爱德士(IDEXX)生物科技有限公司；白蛋白和总蛋白检测试剂盒(ELISA)、免疫球蛋白Ig M、Ig G以及补体C3检测试剂盒(ELISA)，购自宁波美康生物科技股份有限公司。

试验猪只选用母猪胎次为4~5 胎分娩的240 头刚断奶分窝(25±2)日龄健康仔猪，由福建省霞浦县万家福农业专业合作社提供，品种为杜长大，未进行猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫仔猪，平均体重(9.71±1.05)kg。随机分为8组，每组30 头，公母各半。母猪有进行猪繁殖与呼吸综合征病毒活疫苗(CH-1R株)接种，每年3次，肌肉注射，每头免疫1.5头份剂量10^6.0TCID₅₀/头份。各组受试动物饲养管理条件基本一致，基础日粮由福建丰泽农牧饲料有限公司提供(65%玉米+13%豆粕+12%浓缩料+10%膨化大豆)。

对所有试验选用仔猪于断奶后第2 d使用猪繁殖与呼吸综合征病毒活疫苗(CH-1R株)进行免疫，肌肉注射，每头免疫一头份剂量10^6.0TCID₅₀/头份。

Ⅰ～Ⅶ 组为试验组，Ⅰ～Ⅲ 组添加超微粉碎中草药进行饲喂，添加量分别为4、7、10 kg·t^-1；Ⅳ～Ⅵ 组添加超微粉碎中草药+20%替米考星进行饲喂，添加量分别为4 kg·t^-1+1 kg·t^-1、7 kg·t^-1+1 kg·t^-1、10 kg·t^-1+1 kg·t^-1；Ⅶ 组添加20%替米考星进行饲喂(1 kg·t^-1)；Ⅷ 组为空白对照组。试验组和对照组按常规饲养管理，试验期为28 d。

于免疫前1 d以及免疫后28 d对试验组和对照组猪进行前腔静脉采血2 mL，经离心取血清，4℃保存供猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体水平、白蛋白含量、总蛋白含量、免疫球蛋白Ig M含量、免疫球蛋白Ig G含量以及补体C₃ 含量测定使用。

(1)猪繁殖与呼吸综合征抗体水平检测

①检测方法：按照IDEXX Elisa 检测试剂盒检测方法操作。使用前所有试剂应恢复至室温(18~25℃)。试剂应轻轻旋转或振荡混合。包被孔内分别加入100 μL 阴性对照、阳性对照及已稀释好的样本，18~25℃孵育30 min，用大约300 μL 洗涤液洗涤3~5 次；每孔加入100 μL 辣根过氧化物酶标记的抗猪IgG 抗体，18~25℃孵育30 min；用大约300 μL 洗涤液洗涤3~5 次，每孔加入100μL TMB 底物液，18~25℃孵育15 min，加入100 μL终止液终止反应；测量吸光值A_{650 nm}。

S/P=[(U样本A_650nm:PRRS)－(样本A_650nm:NHC)]/[(PC:PRRS)－(PC:NHC)]。

②结果判定： PRRS 抗体的有无(阳性/阴性)通过计算每个样品的样品/阳性对照(S/P)的比值判定，S/P 值 < 0.4为阴性,S/P 值≥ 0.4为阳性。

(2)白蛋白含量、总蛋白含量、免疫球蛋白Ig M 含量、免疫球蛋白Ig G 含量以及补体C₃ 含量的检测

按照宁波美康生物科技股份有限公司免疫球蛋白Elisa检测试剂盒检测方法操作。设置标准品孔、样本孔和空白孔，加不同浓度的标准品50 μL，加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体50 μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60 min；弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1 min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次；加入底物A、B各50 μL，37℃避光孵育15 min；加入终止液50 μL，15 min内，测定各孔的OD_{450 nm}值。

采用Excel和SPSS 13.0进行数据统计，单因子方差分析，LSD多重比较进行显著性分析。

从表 1 可以看出，猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫前检测各组抗体平均S/P 值差异不显著(P> 0.05)猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫后28 d检测抗体平均S/P 值，中草药试验组Ⅰ组(0.4%添加剂量)抗体平均S/P值最高，达到1.733，与对照组相比提高了0.9(P＜0.05)，离散度与对照组相比降低了0.219，说明0.4%中草药添加剂量对提高猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫水平具有一定程度的效果；中西医组合试验组中第IV组(0.4%中草药添加剂量+20%替米考星)抗体平均S/P值最高，达到1.856，与对照组相比提高了1.023(P＜0.05)，离散度与对照组相比降低了0.185，说明0.4%中草药添加剂量+20%替米考星添加剂量对提高猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫水平具有一定程度的效果；添加20%替米考星组猪繁殖与呼吸综合征抗体平均S/P值为1.321，与对照组相比提高了0.299(P>0.05)，离散度与对照组相比降低了0.15。由以上数据可知添加中草药、中草药+20%替米考星以及20%替米考星均能提高猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫水平以及降低离散度，且以0.4%中草药+20%替米考星添加剂量组效果最优。

表 1(Table 1)

表 1 仔猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫前后抗体平均S/P值及离散度 Table 1 Average S/P ratios and dispersion of PRRS antibodies in piglet's sera before and after booster PRRS vaccination 组别 免疫前 免疫后 平均S/P值 离散度 平均S/P值 离散度 同列数据后不同小写字母表示差异显著(P < 0.05)，下同。 中药处理组 0.4%添加剂量(I组) 0.378±0.122 a 0.315 1.733±0.891 b 0.142 0.7%添加剂量(II组) 0.384±0.131 a 0.320 1.674±0.632 b 0.176 1%添加剂量(III组) 0.406±0.112 a 0.295 1.681±0.645 b 0.158 中西医组合处理组 0.4%中草药添加剂量+20%替米考星(IV组) 0.435±0.132 a 0.345 1.856±0.774 b 0.176 0.7%中草药添加剂量+20%替米考星(V组) 0.391±0.101 a 0.281 1.693±0.612 b 0.186 1%中草药添加剂量+20%替米考星(VI组) 0.376±0.109 a 0.331 1.601±0.721 b 0.198 20%替米考星(Ⅶ组) 0.441±0.126 a 0.369 1.321±0.52 b 0.211 对照组(Ⅷ组) 0.352±0.106 a 0.271 0.833±0.322 a 0.361

表 1 仔猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫前后抗体平均S/P值及离散度 Table 1 Average S/P ratios and dispersion of PRRS antibodies in piglet's sera before and after booster PRRS vaccination

从表 2 可以看出，对照组相比，饲料中添加中草药及替米考星可提高仔猪免疫功能。中草药试验组中，0.4%添加剂量(Ⅰ组)血清中各免疫指标含量最高，血清中总蛋白浓度、白蛋白、免疫球蛋白IgG以及补体C3均显著高于对照处理，与其他处理组差异不显著；免疫球蛋白IgM 0.7%添加剂量(Ⅱ组)与对照组差异不显著；中西医组合试验组中，0.4%中草药添加剂量+20%替米考星(Ⅲ组)血清中各免疫指标含量最高，均显著高于对照处理； 20%替米考星(Ⅶ 组)血清中各免疫指标含量也显著高于对照组。不同试验处理(中草药处理、中草药替米考星组合处理、替米考星处理)比较发现，添加0.4%中草药+20%替米考星处理组总蛋白、白蛋白、免疫球蛋白IgG显著高于中草药、替米考星处理组，能有效提高动物机体血清各免疫指标浓度，从而增强其免疫机能。

表 2(Table 2)

表 2 不同浓度中西医处理对仔猪免疫功能的影响 Table 2 Effect of concentrations of CHF/tilmicosin combination on immunity of piglets 组别 总蛋白含量/(mg·mL-1) 白蛋白含量/(mg·mL-1) 免疫球蛋白IgM含量/(mg·mL-1) 免疫球蛋白IgG含量/(mg·mL-1) 补体C3含量/(mg·dL-1) 中药组 0.4%添加剂量(Ⅰ组) 28.4±6.76 b 47.3±16.12 b 0.82±0.17b 10.8±6.07 b 0.26±0.01 b 0.7%添加剂量(Ⅱ组) 27.1±5.43 b 46.5±16.69 b 0.74±0.15 a 9.8±5.14 b 0.24±0.03 b 1%添加剂量(Ⅲ组) 27.5±5.44 b 47.6±16.88 b 0.81±0.13 b 10.8±6.79 b 0.23±0.01 b 中西医组合组 0.4%中草药添加剂量+20%替米考星(Ⅳ组) 29.8±5.78 c 49.2±17.01 c 0.84±0.16 b 11.1±7.46 c 0.27±0.02 b 0.7%中草药添加剂量+20%替米考星(Ⅴ组) 28.1±5.92 b 47.3±16.79 b 0.82±0.14 b 10.1±7.56 b 0.23±0.03 b 1%中草药添加剂量+20%替米考星(Ⅵ组) 27.3±5.87 b 48.5±17.12 b 0.83±0.15 b 9.7±6.77 b 0.22±0.01 b 20%替米考星(Ⅶ组) 26.9±5.59 b 45.9±15. 96 b 0.86±0.18 b 9.9±6.18 b 0.21±0.02 b 对照组(Ⅷ组) 25.7±5.56 a 43.4±15.61 a 0.72±0.17 a 9.1±6.88 a 0.19±0.01 a

表 2 不同浓度中西医处理对仔猪免疫功能的影响 Table 2 Effect of concentrations of CHF/tilmicosin combination on immunity of piglets

动物机体抗病力与其自身免疫功能具有相关性。当机体免疫功能降低时容易导致机体发病，使用疫苗对动物机体进行免疫是动物疫病防控的重要手段。一些中草药对动物机体具有免疫增强作用，能够提高动物免疫功能，例如黄芪、党参、当归等^[9]。杜改梅等^[10]运用中草药饲料添加剂饲喂生猪试验表明中药饲料添加剂对猪体液免疫功能具有一定的促进作用。替米考星是一种由泰乐菌素半合成的大环内酯类畜禽专用抗生素，在肺泡巨噬细胞中可以积聚比细胞外高50 倍的浓度，抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒的复制，改善肺泡巨噬细胞的功能，对猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的繁殖障碍及呼吸系统疾病有良好的防治效果^{[11, 12]}。本试验研究结果表明0.4%中草药+20%替米考星添加剂量组的猪繁殖与呼吸综合征抗体平均S/P 值最高，达到1.856，与对照组相比提高了1.023(P＜0.05)，离散度与对照组相比降低了0.185，同样也表明在基础日粮中添喂复方中草药以及替米考星对仔猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫效果具有增强作用，但是其具体的机理尚不清楚，特别是复方中草药的有效活性物质和机体免疫功能的相关性有待于进一步研究。

血清中的总蛋白主要是白蛋白以及免疫球蛋白。免疫球蛋白具有免疫功能，总蛋白与白蛋白对于维持动物机体血浆胶体渗透压、pH 值、营养等具有重要作用^[13]。动物血清中含量最高的免疫球蛋白是Ig G 免疫球蛋白，在机体免疫功能中具有重要作用^[14]。C₃ 补体是补体系统中的核心成分，是补体系统发挥效应功能的关键成分^[15]。本试验结果表明，添加中草药试验组与对照组相比较，白蛋白水平显著提高，差异显著(P＜0.05)，且以中草药试验组0.4%添加剂量(Ⅰ组)效果最佳，其血清中总蛋白含量与对照组相比提高了2.7 mg·mL^-1，差异显著(P＜0.05)；免疫球蛋白Ig G含量与对照组相比提高了1.7 mg·mL^-1，差异显著(P＜0.05)；补体C₃含量与对照组相比提高了0.07 mg·L^-1，差异显著(P＜0.05)；表明该复方中草药具有提高动物机体免疫力的功能，能够提高仔猪自身的抗病力。本试验对仔猪进行猪繁殖与呼吸综合征抗体水平检测，结果表明添喂复方中草药制剂可以提高仔猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体水平，使仔猪的抗体水平较为均匀，抗体提高水平和稳定性与添加剂量有关，在一定添加剂量能提高仔猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体水平，并不是含量越高抗体越高。本试验中7个试验组猪繁殖与呼吸综合征抗体水平比对照组均有所提高，差异显著(P＜0.05)，且以添喂0.4%的超微粉碎复方中草药剂量是最有效的。

综上表明，本试验在基础日粮中添加0.4%中草药+20%替米考星剂量组的效果最佳，这也表明基础日粮中添喂复方中草药及替米考星药物能够改善体液免疫功能，提高免疫力，在一定的程度上能够提升猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫效果。