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牛轮状病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

刘维巍 林裕胜 张龙 江锦秀 张靖鹏 刘庆华 胡奇林

刘维巍,林裕胜,张龙,等. 牛轮状病毒RT-PCR检测方法的建立及应用 [J]. 福建农业学报,2023,38(4):431−435 doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2023.04.006
引用本文: 刘维巍,林裕胜,张龙,等. 牛轮状病毒RT-PCR检测方法的建立及应用 [J]. 福建农业学报,2023,38(4):431−435 doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2023.04.006
LIU W W, LIN Y S, ZHANG L, et al. A RT-PCR Method for Detecting Bovine Rotavirus [J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences,2023,38(4):431−435 doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2023.04.006
Citation: LIU W W, LIN Y S, ZHANG L, et al. A RT-PCR Method for Detecting Bovine Rotavirus [J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences,2023,38(4):431−435 doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2023.04.006

牛轮状病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

doi: 10.19303/j.issn.1008-0384.2023.04.006
基金项目: 福建省农业高质量发展超越“5511”协同创新工程项目(XTCXGC2021008);福建省科技计划公益类专项(2021R1026007);福建省自然科学基金项目(2021J01484);福建省农业科学院科技创新团队建设项目(CXTD2021007-2)
详细信息
    作者简介:

    刘维巍(1999−),男,硕士,主要从事动物传染病研究(E-mail:2505155891@qq.com

    通讯作者:

    胡奇林(1963−),男,硕士,研究员,主要从事动物传染病学和免疫学研究(E-mail:hql562713@163.com);刘庆华(1970−),男,博士,副教授,主要从事草食动物营养、遗传育种与繁殖领域研究(E-mail:83793089@163.com)

  • 中图分类号: S852.65

A RT-PCR Method for Detecting Bovine Rotavirus

  • 摘要:   目的  建立牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)便捷检测方法,为福建省BRV的流行病学调查检测提供便捷技术支持。  方法  根据GenBank公布的BRV基因组序列,利用Oligo7.0软件设计并合成1对特异性引物,通过优化反应条件,建立了检测BRV的RT-PCR方法,同时开展了特异性、敏感性和重复性试验,并将建立的方法应用于22份临床样品的检测。  结果  建立的方法仅能够扩增出BRV的特异性片段,对其他畜禽常见病原体无特异性扩增;该方法的灵敏度为6.86×105 copies·μL−1。对22份临床样品进行检测,检测出12份阳性样品,阳性率为54.55%。  结论  本研究建立的BRV RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可应用于临床样本的检测,为福建省BRV的诊断和流行病学调查提供了技术支持。
  • 图  1  RT-PCR扩增

    M:DL2000 Marker;1~5:退火温度:52 ℃、54 ℃、56 ℃、58 ℃、60 ℃。

    Figure  1.  RT-PCR amplification

    M: DL2000 Marker; 1–5: annealing temperatures of 52, 54, 56, 58, and 60 ℃, respectively.

    图  2  特异性试验结果

    M:DL2000 Marker;1:BRV阳性对照;2:阴性对照;3~16分别为禽呼肠孤病毒、丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊亚种、牛肺炎支原体、绵羊肺炎支原体、山羊化脓隐秘杆菌、鸡细小病毒、鸡圆圈病毒3型、鸭圆环病毒1型、鸭圆环病毒2型、无乳支原体、大肠杆菌、沙门氏菌、羊口疮病毒。

    Figure  2.  Specificity of methodology

    M: DL2000 Marker; 1: BRV positive control; 2: negative control; 3–16: templates of ARV, Mmc, Mcc, M.bovis, Mo, CP, ChPV, GyV3, DuCV1, DuCV2, MA, EC, SE, and ORFV, respectively.

    图  3  敏感性试验结果

    M:DL2000 Marker;1:BRV阳性对照;2~10:101~109倍比稀释。

    Figure  3.  Sensitivity of methodology

    M: DL2000 Marker; 1: BRV positive control; 2–10: 101–109 times dilutions.

    图  4  临床样品检测结果

    M:DL2000 Marker;1:BRV阳性对照;2~23:22份临床样品;24:阴性对照。

    Figure  4.  Detections on clinical specimens

    M: DL2000 Marker; 1: BRV positive control; 2–23: 22 clinical samples; 24: negative control.

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出版历程
  • 收稿日期:  2022-06-09
  • 录用日期:  2022-06-09
  • 修回日期:  2022-10-22
  • 网络出版日期:  2023-04-14
  • 刊出日期:  2023-04-28

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