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鳗鲡疱疹病毒ORF95基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

李友娟 葛均青 宋铁英 林天龙

引用本文:
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鳗鲡疱疹病毒ORF95基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

    通讯作者: 葛均青(1977-),男,副研究员,主要从事水产保护学研究(E-mail: jqge@163.com)
  • 基金项目:

    国家自然科学基金项目(31101933);福建省科技计划项目——省属公益类科研院所基本科研专项(2009R10035-6);福建省科技平台建设项目(2009N2003)

  • 中图分类号: S941.41

Prokaryotic Expression of Anguillae herpesvirus ORF95 Protein

  • 摘要: 鳗鲡疱疹病毒(Anguillae herpesvirus, AngHV)是淡水鳗鲡的主要病毒性疾病病原之一。根据鳗鲡疱疹病毒(AngHV-1)的基因组序列(GenBank:NC-013668)设计引物,扩增鳗鲡疱疹病毒福建株(AngHV-FJ)ORF95基因的开放阅读框序列,克隆至pMD19-T载体;经限制性内切酶酶切和测序鉴定,进一步将其克隆至原核表达载体pET-32a,构建了表达质粒32a-ORF95,将其转化表达菌株BL21(DE3),经IPTG诱导,实现了ORF95在大肠杆菌中的高效表达。在0.1 mmol·L-1 IPTG、23℃诱导14 h的条件下,可溶性ORF95蛋白的表达量较高,经镍柱纯化获得了高纯度的融合蛋白。
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出版历程
    收稿日期: 
  • 初稿:  2012-06-13
  • 修改稿:  2012-07-07

鳗鲡疱疹病毒ORF95基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

    通讯作者: 葛均青, jqge@163.com
  • 1. 福建省农业科学院生物技术研究所, 福建 福州 350003;
  • 2. 福建农林大学动物科学学院, 福建 福州 350002
基金项目:  国家自然科学基金项目(31101933);福建省科技计划项目——省属公益类科研院所基本科研专项(2009R10035-6);福建省科技平台建设项目(2009N2003)

摘要: 鳗鲡疱疹病毒(Anguillae herpesvirus, AngHV)是淡水鳗鲡的主要病毒性疾病病原之一。根据鳗鲡疱疹病毒(AngHV-1)的基因组序列(GenBank:NC-013668)设计引物,扩增鳗鲡疱疹病毒福建株(AngHV-FJ)ORF95基因的开放阅读框序列,克隆至pMD19-T载体;经限制性内切酶酶切和测序鉴定,进一步将其克隆至原核表达载体pET-32a,构建了表达质粒32a-ORF95,将其转化表达菌株BL21(DE3),经IPTG诱导,实现了ORF95在大肠杆菌中的高效表达。在0.1 mmol·L-1 IPTG、23℃诱导14 h的条件下,可溶性ORF95蛋白的表达量较高,经镍柱纯化获得了高纯度的融合蛋白。

English Abstract

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